Количественное описание деградации N-белка вируса SARS-CoV-2 в клетках, стабильно его экспрессирующих, под действием новых модульных нанотранспортеров

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Были получены две линии эукариотических клеток А549 и А431 со стабильной экспрессией нуклеокапсидного белка (N-белка) вируса SARS-CoV-2, слитого с красным флуоресцентным белком mRuby3. С помощью микроскопии для данных клеток были определены объемы цитоплазмы и ядра. Используя методы количественного иммуноблоттинга, были оценены концентрации слитого белка N-mRuby3 в их цитоплазме. Они составили 19 и 9 мкМ для клеток А549 и А431 соответственно. Используя эти концентрации, по уменьшению флуоресценции клеток была оценена начальная скорость деградации N-белка в изучаемых клетках. В клетках А549 и А431 она оказалась одинаковой и равной 84 нМ/ч. Подход по количественному описанию процесса деградации можно применить для анализа эффективности широкого класса противовирусных препаратов, вызывающих деградацию вирусных белков.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Ю. В. Храмцов

Институт биологии гена Российской Академии наук

Автор, ответственный за переписку.
Email: alsobolev@yandex.ru
Россия, Москва

А. В. Уласов

Институт биологии гена Российской Академии наук

Email: alsobolev@yandex.ru
Россия, Москва

Т. Н. Лупанова

Институт биологии гена Российской Академии наук

Email: alsobolev@yandex.ru
Россия, Москва

Г. П. Георгиев

Институт биологии гена Российской Академии наук

Email: alsobolev@yandex.ru

академик

Россия, Москва

А. С. Соболев

Институт биологии гена Российской Академии наук; Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

Email: alsobolev@yandex.ru

член-корреспондент

Россия, Москва; Москва

Список литературы

  1. Surjit M., Lal S.K. // Infect Genet Evol. 2008. V. 8. P. 397–405.
  2. Wu C., Zheng M. // Preprints. 2020. 2020020247.
  3. Prajapat M., Sarma P., Shekhar N., et al. // Indian J Pharmacol. 2020. V. 52. P. 56.
  4. Liao H.-I., Olson C.A., Hwang S., et al. // J Biol Chem. 2009. V. 284. P. 17512–17520.
  5. Shipunova V.O., Deyev S.M. // Acta Naturae. 2022. V. 14. № 1(52). P. 54–72.
  6. Du Y., Zhang T., Meng X., et al. // Preprints. 2020. doi: 10.21203/rs.3.rs-25828/v1.
  7. Khramtsov Y.V., Ulasov A.V., Lupanova T.N., et al. // Dokl. Biochem. Biophys. 2023. V. 510. P. 87–90.
  8. Lu M., Liu T., Jiao Q., et al. // Eur J Med Chem. 2018. V. 146. P. 251–259.
  9. Fulcher L.J., Hutchinson L.D., Macartney T.J. et al. // Open biology. 2017. V. 7. 170066.
  10. Slastnikova T.A., Rosenkranz A.A., Khramtsov Y. V., et al. // Drug Des Devel Ther. 2017. V. 11. P. 1315–1334.
  11. Khramtsov Y.V., Ulasov A.V., Rosenkranz A.A., et al. // Pharmaceutics. 2023. V. 15, 324.
  12. Klionsky D.J., Abdel-Aziz A.K., Abdelfatah S., et al. // Autophagy. 2021. V. 17. № 1. P. 1–382.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Вестерн-блот с антителами на N-белок вируса SARS-CoV-2 для лизатов трансфицированных N-mRuby3 клеток А549 (1) и клеток А431 (2) и рекомбинантного N-белка концентраций: 200 нМ (3), 600 нМ (4) и 1000 нМ (5). М – белковые стандарты (а); калибровочная кривая зависимости суммарной интенсивности полосы на вестерн-блоте от концентрации N-белка (б).

Скачать (89KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Зависимость между концентрацией N-белка, подвергающегося деградации, и временем инкубации с 500 мМ МНТ клеток А431 и А549, стабильно экспрессирующих N-белок, слитый с mRuby3. Указаны средние значения с соответствующей среднеквадратичной ошибкой (n = 8–17).

Скачать (47KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2024