Изменчивость генома HCV у больных вирусным гепатитом C в острую и хроническую фазы инфекции

Цель исследования. Оценить информативность данных о генетической гетерогенности и изменчивости популяции вируса гепатита C (HCV) больных желтушной формой острого гепатита C, а также исследовать мутационную изменчивость интерферончувствительного региона гена NS5A субтипа 1b HCV больных хроническим гепатитом C, полностью резистентных к терапии интерфероном.
Материалы и методы. Под наблюдением находились 10 больных желтушной формой острого гепатита C и 16 больных хроническим гепатитом C, полностью резистентных к терапии интерфероном. Антитела к HCV определяли с помощью набора VBI HCV EIA 4.0 ("Organon Teknika"). РНК HCV в сыворотке крови выявляли у всех больных в период разгара болезни и далее в течение 12 мес наблюдения. Выделение и детекцию РНК HCV проводили набором "Полигеп С" (НПФ "Литех"), количественное определение РНК HCV - с помощью набора Amplicor HCV monitor test ("Roche"), амплификацию фрагмента генома HCV, включающего HVR1-область размером 351 п. н., проводили методом "гнездовой" ПЦР со стадией обратной транскрипции, определение генотипа HCV - методом SSCP, а также путем прямого ферментативного секвенирования NS5A области генома HCV с использованием реагента Big Dye DNA Sequencing Kit на секвенаторе 377 ABI с последующим выявлением аминокислотных замен в NS5A-регионе.
Результаты. Выявлены генетическая неоднородность и изменчивость индивидуальной популяции HCV, циркулирующей в крови больных острым гепатитом C, наблюдаемые как при 1в-, так и при 2а- и 3а-генотипах. Изменчивость HCV не зависела от уровня вирусной нагрузки. Изменение генетической структуры HCV было существенным у больных со значительными колебаниями активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) и у пациентов со стойко нормальной активностью АЛТ, при этом среднее число генетических вариантов HCV в сравниваемых группах не различалось. Не обнаружено достоверной корреляции между концентрацией вируса в крови больного, его изменчивостью и активностью АЛТ. Исследование показало, что в 25% случаев у больных хроническим гепатитом C не выявлено мутаций в ISDR-регионе, в 75% случаев выявлены 1-3 замены аминокислотных последовательностей, а наиболее частой мутацией является наличие замен в позиции 2218 (гистидин/аргинин).
Заключение. Показано, что генетическая неоднородность и изменчивость индивидуальной популяции HCV, циркулирующей в сыворотке крови, не могут являться прогностическим критерием при оценке вариантов течения острого гепатита C. Результаты, полученные при исследовании генетической гетерогенности интерферончувствительного региона гена NS5A субтипа 1b HCV больных хроническим гепатитом C, частично согласуются с результатами, полученными как на японской, так и на европейской популяции, так как у пациентов Московского региона, резистентных к интерферону, в 25% случаев не выявлена мутационная изменчивость ISDR, как и в японской популяции, однако преобладает промежуточный тип изменчивости, что характерно для европейской популяции.

генетическая гетерогенность HCV, острый и хронический гепатит C, SSСP-анализ, резистентность к интерферону