Aim. To evaluate HCV genome variability in acute and chronic phases of viral hepatitis C. Material and methods. The study of heterogeneity of HCV in acute hepatitis C has detected genetic heterogeneity and variability of individual HCV population circulating in the blood. Significant genetic heterogeneity of HCV was observed in 1b, 2a and 3a genotypes. Variability of HCV did not depend on virus load. Genetic HCV structure changed significantly both in patients with manifest ALT deviations and in normal ALT, mean number of HCV genetic variants in these groups being the same. No significant correlations were found between virus concentration in the patient's blood, its variability and ALT values. Genetic heterogeneity of interferon-sensitive region of gene NS5A subtype 1b HCV was studied in blood of 16 patients with chronic hepatitis C resistant to interferon therapy. Results. It is shown that genetic heterogeneity and variability of an individual HCV population circulating in blood serum can not be a prognostic criterion in assessment of variants of acute hepatitis C course. No mutations in ISDR region were found in 25% of 16 patients studied. 75% cases had 1-3 replacements of amino acid sequences, most frequent mutation was replacements in position 2218 (histidin/arginin). The above results are close to those obtained in Japanese and European populations. Results of ISDR sequence-analysis conducted before treatment may predict efficacy of interferon-alpha2 treatment in an individual patient in future. Large-scale trials are necessary for detection of mutations responsible for resistance to interferon-alpha2 in patients living in Russia.
Цель исследования. Оценить информативность данных о генетической гетерогенности и изменчивости популяции вируса гепатита C (HCV) больных желтушной формой острого гепатита C, а также исследовать мутационную изменчивость интерферончувствительного региона гена NS5A субтипа 1b HCV больных хроническим гепатитом C, полностью резистентных к терапии интерфероном. Материалы и методы. Под наблюдением находились 10 больных желтушной формой острого гепатита C и 16 больных хроническим гепатитом C, полностью резистентных к терапии интерфероном. Антитела к HCV определяли с помощью набора VBI HCV EIA 4.0 ("Organon Teknika"). РНК HCV в сыворотке крови выявляли у всех больных в период разгара болезни и далее в течение 12 мес наблюдения. Выделение и детекцию РНК HCV проводили набором "Полигеп С" (НПФ "Литех"), количественное определение РНК HCV - с помощью набора Amplicor HCV monitor test ("Roche"), амплификацию фрагмента генома HCV, включающего HVR1-область размером 351 п. н., проводили методом "гнездовой" ПЦР со стадией обратной транскрипции, определение генотипа HCV - методом SSCP, а также путем прямого ферментативного секвенирования NS5A области генома HCV с использованием реагента Big Dye DNA Sequencing Kit на секвенаторе 377 ABI с последующим выявлением аминокислотных замен в NS5A-регионе. Результаты. Выявлены генетическая неоднородность и изменчивость индивидуальной популяции HCV, циркулирующей в крови больных острым гепатитом C, наблюдаемые как при 1в-, так и при 2а- и 3а-генотипах. Изменчивость HCV не зависела от уровня вирусной нагрузки. Изменение генетической структуры HCV было существенным у больных со значительными колебаниями активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) и у пациентов со стойко нормальной активностью АЛТ, при этом среднее число генетических вариантов HCV в сравниваемых группах не различалось. Не обнаружено достоверной корреляции между концентрацией вируса в крови больного, его изменчивостью и активностью АЛТ. Исследование показало, что в 25% случаев у больных хроническим гепатитом C не выявлено мутаций в ISDR-регионе, в 75% случаев выявлены 1-3 замены аминокислотных последовательностей, а наиболее частой мутацией является наличие замен в позиции 2218 (гистидин/аргинин). Заключение. Показано, что генетическая неоднородность и изменчивость индивидуальной популяции HCV, циркулирующей в сыворотке крови, не могут являться прогностическим критерием при оценке вариантов течения острого гепатита C. Результаты, полученные при исследовании генетической гетерогенности интерферончувствительного региона гена NS5A субтипа 1b HCV больных хроническим гепатитом C, частично согласуются с результатами, полученными как на японской, так и на европейской популяции, так как у пациентов Московского региона, резистентных к интерферону, в 25% случаев не выявлена мутационная изменчивость ISDR, как и в японской популяции, однако преобладает промежуточный тип изменчивости, что характерно для европейской популяции.