Clinical significance of the determination of antibodies to thrombospondin type 1 containing domain 7A (THSD7A) in membranous nephropathy

Patimat A. Kakhsurueva; Кахсуруева Патимат Ахметовна; Elena S. Kamyshova; Камышова Елена Сергеевна; Irina N. Bobkova; Бобкова Ирина Николаевна; Ekaterina V. Stavrovskaya; Ставровская Екатерина Викторовна; Tatiana E. Rudenko; Руденко Татьяна Евгеньевна; Elena Y. Andreeva; Андреева Елена Юрьевна

doi:10.26442/00403660.2023.06.202268

Clinical significance of the determination of antibodies to thrombospondin type 1 containing domain 7A (THSD7A) in membranous nephropathy

Authors: Kakhsurueva P.A.¹, Kamyshova E.S.¹, Bobkova I.N.¹, Stavrovskaya E.V.¹, Rudenko T.E.¹, Andreeva E.Y.¹
Affiliations:
1. Sechenov First Moscow State Medical University (Sechenov University)
Issue: Vol 95, No 6 (2023)
Pages: 462-467
Section: Original articles
URL: https://ter-arkhiv.ru/0040-3660/article/view/568364
DOI: https://doi.org/10.26442/00403660.2023.06.202268
ID: 568364

Cite item

Full Text

Abstract
Full Text
About the authors
References
Supplementary files
Statistics

Abstract

Background. Membranous nephropathy (MN) is an immunocomplex glomerular disease, which is the most common cause of nephrotic syndrome in adults. Numerous studies have established that autoantibodies against the target podocyte autoantigens, including the thrombospondin type 1 domain containing 7A (THSD7A), play a leading role in the development of idiopathic MN.

Aim. To evaluate the prevalence of anti-THSD7A autoantibodies (anti-THSD7A AB) in a group of Russian patients with MN.

Materials and methods. Serum titers of anti-THSD7A AB were tested in 61 patients with biopsy-proven MN and 12 healthy controls.

Results. The prevalence of anti-THSD7A AB was not differing significantly in patients with MN and in the control group (110.9 [71.63; 210.62] and 159.25 [125.64; 231.97] pg/ml, respectively; p=0.111). When comparing subgroups of anti-PLA2R-negative patients and patients who did not receive immunosuppressive therapy with the control group, there were also no statistically significant differences in the Anti-THSD7A AB levels (p>0.05). In the MN group, 1 (1.6%) patient was anti-THSD7A-positive: a 60-year-old man with anti-PLA2R-negative MN and the presence of hormonally inactive adenomas of both adrenal glands and colon polyps (villous adenoma with focal moderate dysplasia, tubulo-villous and tubular adenoma with focal moderate severe dysplasia).

Conclusion. THSD7-associated MN is a rare variant of MN and is usually detected in PLA2R-negative patients. Screening for malignancies in THSD7A-positive MN patients is proposed.

Keywords

membranous nephropathy, thrombospondin type 1 domain-containing 7A, THSD7A, M-type phospholipase A2 receptor, PLA2R

Full Text

Список сокращений

АТ – антитела

ГК – глюкокортикоиды

ИМН – идиопатическая мембранозная нефропатия

ИСТ – иммуносупрессивная терапия

МН – мембранозная нефропатия

ПУ – протеинурия

ELISA – твердофазный иммуноферментный анализ

PLA2R – трансмембранный рецептор фосфолипазы А2 М-типа

THSD7A (thrombospondin type 1 domain-containing 7A) – домен тромбоспондина 1-го типа, содержащий 7А

Введение

Мембранозная нефропатия (МН) – наиболее частая причина нефротического синдрома у взрослых. Патогенез протеинурии (ПУ) при МН обусловлен повреждением подоцитов в результате депозиции в субэпителиальном пространстве иммунных комплексов с последующей активацией системы комплемента. Иммунные комплексы могут формироваться in situ при связывании циркулирующих антител (АТ) с собственными подоцитарными аутоантигенами или экзогенными антигенами, «имплантированными» в клубочек, а также образовываться в циркуляции и затем откладываться под ножками подоцитов [1, 2]. Многочисленными исследованиями установлено, что в развитии идиопатической МН (ИМН) ведущую роль играют АТ к специфическим аутоантигенам, экспрессируемым на поверхности подоцитов. К настоящему времени обнаружено более 10 целевых подоцитарных антигенов, среди которых наиболее изучен трансмембранный рецептор фосфолипазы А2 М-типа (PLA2R) – первый аутоантиген, идентифицированный в 2009 г. L. Beck и соавт. [3] при ИМН у взрослых. С АТ к PLA2R ассоциировано до 70–80% случаев ИМН в европейской популяции [3–5] и до 50–60% случаев – в японской [6–8]. Эти АТ активно используют в клинической практике для диагностики ИМН [9], а также для оценки активности заболевания, выбора тактики лечения [10, 11], прогнозирования ответа на терапию и времени наступления ремиссии [12, 13], риска развития почечной недостаточности [14] и рецидива МН в трансплантате [15]. Среди PLA2R-негативной ИМН около 8–14% случаев (т.е. 2–5% всех пациентов с ИМН) ассоциированы со вторым целевым подоцитарным антигеном, идентифицированным в 2014 г., – доменом тромбоспондина 1-го типа, содержащим 7А (thrombospondin type 1 domain-containing 7A – THSD7A) [16–18]. Патогенетическая роль АТ к THSD7A в развитии МН подтверждена в исследованиях у животных и в экспериментах in vitro [19, 20]. Описана связь между THSD7A-ассоциированной МН и злокачественными новообразованиями [17, 21].

Цель исследования – изучить частоту выявления АТ к THSD7A в группе российских пациентов с МН.

Материалы и методы

Участники исследования

В исследование включили 61 пациента с морфологически подтвержденной МН. Контрольную группу составили 12 здоровых добровольцев (50% мужчин).

Методы измерения целевых показателей

Уровни АТ к THSD7A в сыворотке крови определяли с использованием набора ELISA Kit for Anti-Thrombospondin Type I Domain Containing Protein 7A Antibody (Anti-THSD7A; Cloud-CloneCorp., КНР) методом иммуноферментного анализа. Концентрацию АТ к PLA2R оценивали иммуноферментным методом с помощью коммерческой тест-системы компании Euroimmum (Германия); титры АТ к PLA2R<1:10 рассматривали как референсные значения.

Статистический анализ

Для непрерывных переменных в зависимости от соответствия данных нормальному распределению рассчитывали среднее значение и стандартное отклонение или медиану и межквартильный размах, для качественных – частоты (доли, проценты). Межгрупповые различия оценивали с помощью t-критерия Стьюдента или U-критерия Манна–Уитни в зависимости от характера распределения. Для проверки статистической значимости различий частотных показателей использовали критерий χ² Пирсона, а при ожидаемой частоте явлений менее 5 применяли точный критерий Фишера. При значении p<0,05 различия считали статистически значимыми; р в пределах от 0,05 до <0,1 рассматривали как тенденцию к различию.

Результаты

В исследование вошли 42 мужчины и 19 женщин; медиана возраста составила 51 (36,5; 59) год. Длительность МН на момент включения в исследование – 13 (7; 35,5) мес. Нефротический синдром наблюдался у 37 (60,7%) пациентов, из них у 11 пациентов ПУ превышала 8 г/сут. Снижение функции почек (расчетная скорость клубочковой фильтрации <60 мл/мин/1,73 м²) отмечено у 32,8% больных с МН, из них у 12 пациентов в рамках сохраняющейся активности МН. Иммуносупрессивную терапию (ИСТ) на момент исследования получали 36 участников: сочетанную терапию циклофосфамидом и глюкокортикоидами (ГК), в том числе в сверхвысоких дозах, – 20 пациентов, циклоспорин А в сочетании с низкими дозами ГК – 13 и монотерапию ГК, в том числе в сверхвысоких дозах, – 3 пациента.

Уровни АТ к PLA2R определены у 56 пациентов; положительные титры выявлены у 31 из них. С учетом описанных в литературе различий в активности МН в зависимости от статуса по АТ к PLA2R мы сравнили показатели в группах позитивных (aнти-PLA2R «+») и негативных (aнти-PLA2R «-») по АТ к PLA2R пациентов (табл. 1).

*Таблица 1.* Клинико-лабораторные характеристики пациентов с МН на момент определения АТ к THSD7A в зависимости от статуса по АТ к PLA2R *Table 1.* Clinical-laboratory characteristics of patients with membranous nephropathy when determining antibodies to THSD7A depending on the status of antibodies to PLA2R
Показатель	Aнти-PLA2R «+» (n=31)	Анти-PLA2R «-» (n=25)	p
Возраст, лет	50 (40,0; 59,0)	44 (28,0; 52,5)	0,222
Мужчин, абс. (%)	24 (77,4)	14 (56)	0,158
Длительность ИМН, мес.	10 (4,0; 26,0)	21 (10,0; 65,0)	0,019
Частота НС, %	77,4	44,0	0,011
ПУ, г/сут	3,8 (2,1; 7,3)	2,1 (0,9; 5,1)	0,030
Общий белок, г/л	51,2 (45,2; 57,0)	60,5 (50,8; 68,0)	0,008
Альбумин, г/л	27,9 (24,7; 32,7)	36,7 (26,3; 41,1)	0,014
Сывороточный креатинин, мкмоль/л	91,1 (76,0; 114,0)	84,9 (62,4; 107,2)	0,108
СКФ по Ребергу–Тарееву, мл/мин	101,2 (66,6; 131,9)	105,5 (70,6; 134,9)	0,767
Систолическое АД, мм рт. ст.	130 (120,0; 140,0)	120 (110,0; 130,0)	0,260
Диастолическое АД, мм рт. ст.	80 (70,0; 90,0)	80 (70,0; 90,0)	0,928
Общий холестерин, ммоль/л	6,6 (5,3; 8,3)	6,6 (5,2; 7,4)	0,485
Триглицериды, ммоль/л	2,2 (1,6; 3,0)	2,2 (1,5; 3,8)	0,901
Глюкоза, ммоль/л	4,7 (4,4; 5,5)	4,9 (4,6; 5,4)	0,832
Гемоглобин, г/л	135 (124,5; 142,0)	133 (117,8; 148,8)	0,768
Фибриноген, г/л	5,6 (4,6; 6,8)	5,1 (3,7; 6,1)	0,724
Примечание. НС – нефротический синдром, АД – артериальное давление, СКФ – скорость клубочковой фильтрации.

У aнти-PLA2R «+» пациентов чаще наблюдался нефротический синдром с более низкими уровнями альбумина и общего белка, что свидетельствует о более высокой активности заболевания.

Уровни АТ к THSD7A оценены у 61 пациента с МН. При сравнительном анализе концентраций в общей группе пациентов с МН и в контрольной группе статистически значимых различий не выявлено (p=0,111); рис. 1.

Рис. 1. Уровни АТ к THSD7A в общей и контрольной группах.

Fig. 1. Antibody levels to THSD7A in general and control groups.

При анализе в подгруппах концентрации АТ к THSD7A у анти-PLA2R-негативных пациентов и лиц из контрольной группы статистически значимо не различались и составили 149,3 (100,1; 253,7) и 159,25 (125,64; 231,97) пг/мл соответственно (p>0,05).

Поскольку проводимая до момента забора образцов крови ИСТ могла повлиять на уровни АТ к THSD7A, мы сравнили концентрации данных АТ у пациентов, не получавших ИСТ, с контрольной группой: статистически значимые различия отсутствовали (p>0,05).

В связи с тем, что для набора, использованного в нашем исследовании для определения уровней АТ к THSD7A, референсные значения не указаны, в качестве положительных значений АТ к THSD7A мы рассматривали показатели, превышающие значения 80-го процентиля в контрольной группе. Соответственно, в группе МН анти-THSD7A- позитивным оказался 1 (1,6%) пациент. Это мужчина 60 лет с анти-PLA2R-негативной морфологически подтвержденной МН, дебютировавшей за 4,5 года до включения в исследование, и нефротическим синдромом (ПУ – 6,2 г/сут, альбумин – 14,8 г/л, общий белок – 47,4 г/л) без нарушения функции почек. Пациент в течение 6 мес получал монотерапию метилпреднизолоном в максимальной дозе 24 мг/сут с достижением частичной ремиссии (ПУ – 1,6 г/сут, альбумин – 29 г/л, общий белок – 59 г/л). При первичном обследовании у него выявлены гормонально неактивные аденомы обоих надпочечников, а в дальнейшем обнаружены полипы толстой кишки (ворсинчатая аденома с очаговой умеренной дисплазией, тубуло- ворсинчатая и тубулярная аденома с очаговой умеренно тяжелой дисплазией), а также образование правого легкого в области средостения. В связи с низким риском прогрессирования МН и онконастороженностью ИСТ не проводилась, назначен лозартан в дозе 50 мг/сут. На момент исследования – ПУ до 1 г/сут, функция почек соответствовала 3б стадии хронической болезни почек. При повторном обследовании данных за опухоль легкого не получено, однако с учетом тяжести дисплазии ранее выявленных полипов кишечника пациенту рекомендована повторная колоноскопия.

Обсуждение

В нашем исследовании впервые в отечественной практике определены уровни АТ к THSD7A в сыворотке пациентов с МН. Частота THSD7A-позитивности составила 1,6%, что согласуется с результатами других авторов и подтверждает редкость данного варианта среди всех форм МН [17, 18]. Тем не менее разброс показателя распространенности положительных АТ к THSD7A позволяет обсуждать вклад в подобную гетерогенность размера и состава исследуемых выборок, методов определения АТ, ИСТ, времени определения АТ и т.п. [22].

В большинстве предыдущих работ для определения концентрации АТ к THSD7A использовали Вестерн-блот (Western blot) [16] и/или непрямую реакцию иммунофлуоресценции [17], которые дают только полуколичественный результат. Несколько лет назад C. Zaghrini и соавт. [23] впервые предложили способ определения АТ к THSD7A с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) и валидировали его в группе пациентов с МН. Авторы показали сходную чувствительность методов Western blot и ELISA, а также хорошую корреляцию уровней АТ к THSD7A, оцененных методом ELISA и с помощью непрямой реакции иммунофлуоресценции [23]. Пороговое значение, выше которого уровень АТ к THSD7A считали положительным, определено с помощью ROC-анализа и составило 16 относительных единиц в мл (RU/мл). В нашем исследовании концентрации АТ к THSD7A у пациентов с МН и в контрольной группе не различались, соответственно ROC-анализ не применялся, а пороговый уровень определяли как значение 80-го процентиля в контрольной группе.

Помимо выявления положительных уровней АТ к THSD7A в сыворотке крови для диагностики THSD7A-ассоциированной МН применяют иммуногистохимическое исследование нефробиоптата. У большинства пациентов результаты обоих методов совпадают. Так, в работе S. Sharma и соавт. [24] положительные АТ к THSD7A определялись в образцах сыворотки всех 24 пациентов, у которых в ткани почки присутствовал THSD7A, в то время как у 20 пациентов с отрицательным окрашиванием биоптата почки на THSD7A эти АТ отсутствовали. Однако в ряде случаев обнаруживают только серопозитивность по АТ к THSD7A или только отложение THSD7A в ткани почки [17, 18, 23]. Следовательно, выявление одновременно положительных АТ к THSD7A в сыворотке крови и THSD7A в ткани почки может повысить чувствительность диагностики THSD7A-ассоциированной МН.

Установлено, что диагностическое значение методов выявления THSD7A может различаться в зависимости от популяции пациентов с МН. Недавний метаанализ Y. Liu и соавт. [22] (10 статей, 4545 пациентов), цель которого заключалась в оценке диагностической эффективности серологической диагностики ИМН, показал, что определение АТ к THSD7A имеет большее значение в диагностике у пациентов с МН и отрицательными АТ к PLA2R; это позволяет обсуждать возможность применения серологического исследования в качестве неинвазивного метода диагностики при PLA2R-негативной МН.

Работы по изучению влияния этнической принадлежности на распространенность THSD7A-позитивной МН малочисленны, а их результаты противоречивы. S. Hara и соавт. [25] отметили различия в частоте выявления THSD7A в биоптатах почки, поступивших из северного и юго-западного регионов Японии, в связи с чем (по аналогии с PLA2R-позитивной МН) высказано предположение о наличии субпопуляций пациентов с более высокой или низкой предрасположенностью к THSD7A-ассоциированной МН, обусловленной потенциальным влиянием генетических особенностей, а также факторов внешней среды и образа жизни. В то же время в метаанализе S. Ren и соавт. [26], включавшем 10 исследований и 4121 пациента с МН, статистически значимые различия по THSD7A-позитивности среди европейцев и выходцев из стран Азии отсутствовали. В нашей работе все пациенты принадлежат к европеоидной расе.

Недавние исследования показали, что THSD7A-позитивность тесно ассоциирована с возникновением злокачественных новообразований [17, 24, 27]. По разным оценкам, злокачественные опухоли обнаруживают у 20–25% THSD7A-позитивных пациентов с МН, при этом медиана времени с момента установления диагноза МН составляет 3 мес, что позволяет говорить о повышенном риске развития злокачественных новообразований у пациентов с THSD7A-ассоциированной МН [17, 21]. В работе C. Zaghrini и соавт. [23] злокачественные опухоли в анамнезе присутствовали у 8 (16%) из 49 THSD7A-позитивных пациентов с МН, но только у 3 больных рак (желудка, ободочной кишки и простаты) развился в течение 2 лет после установления диагноза МН. Отмечают, что большинство этих пациентов – мужчины в возрасте старше 65 лет [17, 23]. После химиотерапии или резекции опухолей у большинства THSD7A-позитивных пациентов наблюдалось значительное уменьшение выраженности протеинурии. При THSD7A-позитивной МН описано присутствие THSD7A как в ткани опухоли (что в сочетании с увеличением экспрессии этого антигена свидетельствовало об активном синтезе опухолью THSD7A), так и в фолликулярных дендритных клетках, инфильтрированных опухолью лимфатических узлов [17]. Таким образом, несмотря на то что причинно-следственная связь между злокачественными новообразованиями и THSD7A-ассоциированной МН нуждается в дальнейшем изучении с целью установления лежащих в ее основе механизмов, необходимо рассмотреть возможность скрининга на онкологические заболевания THSD7A-позитивных пациентов с МН. В нашем исследовании у пациента с положительными АТ к THSD7A имелись аденомы обоих надпочечников и полипы толстой кишки с признаками дисплазии, что обусловливало высокую онкологическую настороженность и необходимость мониторинга с целью выявления злокачественной трансформации.

Заключение

THSD7-ассоциированная МН является редким вариантом МН и, как правило, выявляется у PLA2R-негативных пациентов. Для повышения диагностической эффективности целесообразно одновременное исследование АТ к THSD7 в сыворотке крови и в почечной ткани. Всем THSD7A-позитивным пациентам следует проводить скрининг злокачественных новообразований как на момент установления диагноза МН, так и в дальнейшем, учитывая возможность развития опухоли через несколько месяцев и лет после верификации диагноза THSD7A-позитивной МН.

Раскрытие интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Disclosure of interest. The authors declare that they have no competing interests.

Вклад авторов. Авторы декларируют соответствие своего авторства международным критериям ICMJE. Все авторы в равной степени участвовали в подготовке публикации: разработка концепции статьи, получение и анализ фактических данных, написание и редактирование текста статьи, проверка и утверждение текста статьи.

Authors’ contribution. The authors declare the compliance of their authorship according to the international ICMJE criteria. All authors made a substantial contribution to the conception of the work, acquisition, analysis, interpretation of data for the work, drafting and revising the work, final approval of the version to be published and agree to be accountable for all aspects of the work.

Источник финансирования. Авторы декларируют отсутствие внешнего финансирования для проведения исследования и публикации статьи.

Funding source. The authors declare that there is no external funding for the exploration and analysis work.

Информированное согласие на публикацию. Пациенты подписали форму добровольного информированного согласия на публикацию медицинской информации.

Consent for publication. Written consent was obtained from the patients for publication of relevant medical information.