IMMUNOLOGICAL DISORDERS AND CYTOKINE PROFILE IN SYSTEMIC AND LOCALIZED SCLEROSIS

Full Text

КФ — кислая фосфатаза ОСД — ограниченная склеродермия ССД — системная склеродермия ФНО — фактор некроза опухоли ХЛ — хемилюминесценция ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы ных. Синдром Шегрена был выявлен у 5 (20,8%) больных. Поражение клапанного аппарата (стеноз устья аорты) обнаружено у одного больного, миокардиосклероз — у 12 (50%), адгезивный перикардит — у 9 (37,5%). Базальный пневмосклероз отмечен у 12 (50%) пациентов, сухой плеврит — у 5 (20,8%), поражения почек — у 6 (25%), артериальная гипертония у 3 (12,5%), эзофагит — у 6 (25%), поражение ЦНС — у 4 (16,7%). ОСД диагностирована в стадии плотного отека у 12 (35,3%) больных, в стадии индурации — у 18 (52,9%), в стадии атрофии — у 4 (11,7%). У 2 (5,9%) пациентов обнаружена алопеция, при этом бляшечная форма ОСД наблюдалась у 32 (94,1%), линейная — у 2 (5,9%). При клинико-лабораторном и инструментальном обследовании больных ОСД признаков системности не было выявлено. Фенотип лимфоцитов (CD3+, CD4+, CD11b+, CD8+, CD16+, CD19+, CD25+, CD95+, HLA-DR+) определяли с помощью метода непрямой иммунофлюоресценции [11]. Популяции моноцитов и нейтрофилов периферической крови человека для тестирования их метаболических функций получали с помощью центрифугирования на двойном градиенте плотности фикол-ла — верографина [11] с последующим выделением моноцитов из смеси мононуклеаров центрифугированием в градиенте плотности перколла [12]. Тесты спонтанной и индуцированной 1-миллиардной взвесью убитого нагреванием эпидермального стафилококка люцигенини люминолзависимой хемилюми-несценции (ХЛ) нейтрофилов и моноцитов, отражающие соответственно продукцию супероксиданиона и гидроксильного радикала, учитывали на жидкостно-сцинцилляционном счетчике Бета-1 [11]. Определяли также активность кислой фосфатазы (КФ) и катионных белков (КБ) в фагоцитирующих клетках по методике [11], циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови нефелометрическим методом, цитокинов — интерлейкинов (ИЛ) 1ß, 4, 6, фактора некроза опухоли (ФНО) и антител к нативной двухцепочечной ДНК (аДНК) с помощью иммуноферментного анализа (ИФА), согласно инструкциям производителей. Функциональный резерв фагоцитов оценивали по коэффициенту активации (КА) — отношение индуцированных тестов к спонтанным. Статистическую обработку данных с нормальным распределением проводили с помощью программного пакета Statistica 5,5 (StatSoft, Inc.), вычисляя среднее значение и стандартное отклонение (m ± SD), а в случае несимметричного распределения данных — с помощью теста Манна—Уитни. Различия между группами считали достоверными при р < 0,05. Контактная информация: Романова Надежда Витальевна — д-р мед. наук, доц. каф. кожных и венерических болезней Ярославской ГМА, тел.: 8-4852-54-09-75, e-mail: n.v.romanova@mail.ru — 29 — Н. В. Романова и соавт. Таблица 1 Содержание ЦИК, аДНК и цитокинов в сыворотке крови при различных формах склеродермии Таблица 3 Кислороднезависимые функции фагоцитов при различных формах склеродермии Показатель Обследуемые группы (M ± SD) контроль (n = 33) ОСД (n = 34) ССД (n = 24) ЦИК, ед. 38,3 ± 8,17 66,4 ± 35,1* 52,7 ± 27,3* аДНК, МЕ/мл 75,26 ± 63,1 65,9 ± 25,6 188,5 ± 184,7* Содержание цитокинов, пкг/мл ИЛ-1Р 9,4 ± 11,7 58,4 ± 32,6* 97,4 ± 57,9* ИЛ-4 3,6 ± 6,1 32,2 ± 35,9* 65,7 ± 91,2* ИЛ-6 2,8 ± 2,9 3,7 ± 2,3 6,3 ± 19,2 ФНО 5,5 ± 8,4 46,9 ± 45,1* 51,8 ± 58,5* Примечание. Здесь и в табл. 2—4 * — достоверное различие (р < 0,05). Таблица 2 КЗМ фагоцитов при различных формах склеродермии Показатель, Обследуемые группы (M ± SD) ■ 104 имп/мин контроль (n = 33) ОСД (n = 34) ССД (n = 24) сХЛ Лг Нф 1,4 ± 1,1 2,3 ± 3,4 2,9 ± 2,8* иХЛ Лг Нф 3,1 ± 2,2 3,4 ± 5,3 1,5 ± 2,2* КА ХЛ Лг Нф 2,2 ± 1,9 1,5 ± 2,16 0,6 ± 0,7* сХЛ Лг Мн 0,7 ± 0,6 0,9 ± 1,0 1,4 ± 1,0* иХЛ Лг Мн 1,0 ± 0,8 0,7 ± 1,5 1,1 ± 2,3 КА ХЛ Лг Мн 1,4 ± 0,8 0,9 ± 1,4 0,6 ± 0,7* сХЛ Лм Нф 1,9 ± 0,8 4,9 ± 5,8 * 5,6 ± 5,6* иХЛ Лм Нф 7,9 ± 5,4 5,2 ± 8,5 3,0 ± 4,0* КА ХЛ Лм Нф 2,9 ± 1,9 2,8 ± 8,8 0,7 ± 0,8* сХЛ Лм Мн 0,7 ± 0,3 1,1 ± 1,1 3,1 ± 3,7*, ** иХЛ Лм Мн 1,8 ± 1,5 1,8 ± 2,7 0,8 ± 1,3* КА ХЛ Лм Мн 2,5 ± 1,8 1,5 ± 3,7 0,3 ± 0,7* Примечание. с — спонтанный тест; и — индуцированный тест; ХЛ — хемилюминесценция; Лм — люминол; Лг — люцигенин; Нф — нейтрофил; Мн — моноцит. Здесь и в табл. 3 ** — достоверное различие между группами больных с ОСД и ССД (р < 0,05). Результаты Уровень ЦИК у больных ОСД и ССД был выше, чем у здоровых лиц, однако существенной разницы в этом показателе при ОСД и ССД не отмечено (табл. 1). аДНК были увеличены только при ССД. Уровни m-1ß, ИЛ-4 и ФНО были увеличены как при ОСД, так и при ССД. У больных ОСД по сравнению со здоровыми лицами выявлено статистически значимое повышение функциональной активности нейтрофи-лов в люминолзависимом тесте спонтанной ХЛ (табл. 2). У больных ССД увеличение кислородза-висимого метаболизма (КЗМ) затрагивало не только показатели спонтанной люцигенини люминол-зависимой ХЛ нейтрофилов, но и моноцитов. Индуцированная ХЛ циркулирующих фагоцитов при ССД была статистически значимо снижена во всех тестах, исключая индуцированную люцигенин-зависимую ХЛ моноцитов. КА нейтрофилов и моноцитов во всех тестах ХЛ были снижены. Различия в КЗМ циркулирующих фагоцитов при ОСД и ССД касались единственного показателя — спонтанной люминолзависимой ХЛ моноцитов, достоверно повышенной у больных ССД. КислороднеОбследуемые группы (M ± SD., ■ 10-3) зависимые функции контроль (n = 33) ОСД (n = 34) ССД (n = 24) КФ Мн 173,1 ± 49,8 192,8 ± 46,6 175,3 ± 59,5 196,8 ± 88,9 249.7 ± 98,3*,** 263.8 ± 158*,** КА КФ Мн 1,1 ± 0,4 1,1 ± 0,3 1,1 ± 0,4 КФ Нф 149,5 ± 38,1 176,2 ± 53,6 155,1 ± 51,1 155,7 ± 51,8 360.1 ± 288,7*, ** 313.2 ± 240,5*, ** КА КФ Нф 1,2 ± 03 1,0 ± 0,3 0,9 ± 0,4 КБ Мн 61,7 ± 18,0 63,4 ± 29,6 76,1 ± 41,7 73,9 ± 58,9 106,8 ± 80,2*, ** 115,1 ± 105,1*,** КА КБ Мн 1,0 ± 0,2 0,9 ± 0,2 1,1 ± 0,3 КБ Нф 62,2 ± 17,6 57,8 ± 19,8 74,6 ± 47,9 70,4 ± 38,2 95,5 ± 73,3*, ** 107,2 ± 82,6*, ** КА КБ Нф 0,9 ± 0,2 0,9 ± 0,3 1,2 ± 0,4*, ** Примечание. Числитель — показатели спонтанных тестов, знаменатель — индуцированных. Не выявлено достоверных изменений кислороднезависимо-го метаболизма нейтрофилов и моноцитов у больных ОСД по сравнению с группой контроля (табл. 3). У больных ССД констатировано увеличение в клетках КФ и КБ по данным спонтанных и индуцированных тестов на фоне неизмененных КА клеток. При ССД по сравнению с ОСД в циркулирующих фагоцитах были существенно повышены спонтанная и стимулированная продукция КФ и КБ, КА нейтрофилов, по данным определения КБ. У больных ОСД и ССД по сравнению с группой контроля наблюдалось снижение содержания лимфоцитов CD3+, CD4+, CD1 lb+ на фоне достоверного повышения уровня лимфоцитов CD8+, CD16+, CD19+, CD25+, CD95+ и HLA-DR+ (табл. 4). У больных ССД по сравнению с пациентами ОСД отмечено увеличение количества лимфоцитов CD25+. О бсужде ние Выполненные исследования продемонстрировали ряд сходных иммунных нарушений (увеличение уровней ЦИК, цитоки-нов, свободнорадикальное окисление нейтрофилов, изменения Таблица 4 Фенотип лимфоцитов при различных формах склеродермии Формы склеродермии Фенотип лимфоцитов (М ± SD., %) CD3+ CD4+ CD8+ CD11b+ CD16+ CD19+ CD25+ 1. ОСД (n = 34) 60 ± 9* 36 ± 8* 29 ± 6* 19 ± 6* 18 ± 4* 21 ± 6* 19 ± 7* 2. ССД (n = 24) 57 ± 12* 37 ± 5* 31 ± 5* 19 ± 5* 19 ± 3** 20 ± 6* 24 ± 7* 3. ССД А1 (n = 8) 63 ± 11* 35 ± 4* 32 ± 7* 22 ± 4 19 ± 3* 19 ± 8* 22 ± 9* 4. ССД А2 (n = 16) 55 ± 11* 37 ± 5* 30 ± 4* 18 ± 6* 19 ± 4* 21 ± 6* 23 ± 9* 5. Доноры (n = 33) 73 ± 6 41 ± 4 26 ± 5 22 ± 4 14 ± 2 7 ± 2 7 ± 2 р (t-критерий Стьюдента—Фишера) 1—2 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 0,02 3—4 > 0,05 > 0,02 > 0,03 > 0,05 > 0,05 > 0,05 > 0,05 Примечание. А1 и А2 — соответственно низкая и высокая степени активности процесса. — 30 — Терапевтический архив, 2012, № 5, С. 31—35 фенотипа лимфоцитов) при ОСД и ССД провоспалительного характера на фоне ранней и поздней активации иммунной системы с развитием иммунного ответа по ТЪ2. Эти данные отражают иммунопатологическую обшцость ОСД и ССД. На значимую роль В-лимфоцитов и свободнорадикального окисления в патогенезе склеродермии указывают также данные последних исследований [13—16]. Вместе с тем имелись существенные различия в характеристиках иммунопатологических процессов при указанных заболеваниях. Так, КЗМ циркулирующих фагоцитов при ОСД по сравнению с таковым у здоровых лиц характеризовался увеличением только одного показателя—спонтанной люминолзависимой ХЛ и нейтрофилов, отражающего продукцию высокотоксичного гидроксильного радикала, на фоне сохранности показателей индуцированной ХЛ и функционального резерва клеток. При ССД повышение продукции активных форм кислорода не только ней-трофилами, но и моноцитами отмечено во всех тестах с уменьшением показателей индуцированной ХЛ и функционального резерва клеток. Кислороднезависимый метаболизм нейтрофилов и моноцитов увеличивался исключительно при ССД. Данные литературы свидетельствуют о том, что активация метаболических функций фагоцитов сопровождается увеличением продукции ги-стотоксических факторов, вносящих существенный вклад в развитие склерогенеза, серьезных повреждений клеток и сосудистой системы [17]. Сравнение исследованных иммунных нарушений при ОСД и ССД позволило выявить различия по виду достоверного увеличения при ССД спонтанной люминолзависимой ХЛ моноцитов, кислороднезависимых функций нейтрофилов и моноцитов, лимфоцитов с маркерами ранней активации (CD25+). Эти данные указывают на важную роль вовлечения моноцитов в развитие системных поражений при ССД. Проведенные исследования свидетельствуют о возможности использования в качестве дополнительных лабораторных методов для дифференциальной диагностики ОСД и ССД тестов, характеризующих метаболические функции циркулирующих фагоцитов и фенотип лимфоцитов.

About the authors

N V Romanova

Medical Academy, Yaroslavl

Email: n.v.romanova@mail.ru

N P Shilkina

Medical Academy, Yaroslavl

Email: shilkin39@mail.ru

E Yu Kaprelyants

Medical Academy, Yaroslavl

Email: trufalena@mail.ru

V A Romanov

Medical Academy, Yaroslavl

Email: microbyama@mail.ru

References

Supplementary files