Влияние лигандов никотиновых ацетилхолиновых рецепторов на адгезивные свойства гранулоцитов костного мозга мыши при воспалении

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Только для подписчиков

Аннотация

Первой стадией выхода зрелых нейтрофильных гранулоцитов из костного мозга в кровь и последующей миграции в очаг воспаления является прикрепление к эндотелию сосудов. Эндо- и экзогенные факторы модифицируют способность клеток к адгезии через рецепторы разного типа, включая никотиновые рецепторы ацетилхолина (нАХР). Однако участие нАХР в регуляции адгезии гранулоцитов костного мозга (КМ-гранулоцитов) и роль сигнальных компонентов в действии никотина исследованы мало. Целью данной работы явилось изучение роли нАХР разных типов в регуляции адгезии КМ-гранулоцитов мыши при остром воспалении. Работа проведена на КМ-гранулоцитах мышей линии BALB/c с применением статической адгезионной пробы, конфокальной микроскопии, ингибиторного анализа, ПЦР с обратной транскрипцией. Роль типов нАХР оценена с помощью селективных антагонистов: 10 нМ α-CTX (α7), 10 нМ GIC и 5 нМ MII (α3β2), 200 нМ MII (α3β2 и α7), RgIA и Vc1.1 (α9α10). Показано, что количество прикрепившихся КМ-гранулоцитов, оцениваемое по оптической плотности, не различалось у животных с острым воспалением и без него. Никотин (0.01–100 мкМ, 30 мин) значительно усиливал адгезию клеток животных контрольной и “воспалительной” групп. Токсины α-CTX, RgIA и Vc1.1 усиливали адгезивность клеток мышей обеих групп, как и 200 нМ MII – в контрольной группе. В пробах с флуоресцентным мечением показана экспрессия субъединиц α7 и α10 нАХР на мембране нативных КМ-гранулоцитов. С помощью ингибиторов обнаружено, что действие никотина на адгезию КМ-гранулоцитов опосредовано гетеротримерными G-белками, PKC, PI3K и ROCK как в норме, так и при наличии воспаления. В регуляции адгезии КМ-гранулоцитов мыши участвуют преимущественно α7 и α9α10 типы нАХР, вклад α3(α6*)β2 незначителен, возможно вследствие низкой экспрессии α3/α6*-субъединиц. Роль α7 нАХР, присутствующих на мембране КМ-гранулоцитов конвенционально, в регуляции адгезивности клеток никотином усиливается при развитии воспаления в организме.

Полный текст

Доступ закрыт

Об авторах

Э. А. Жирова

Институт биофизики клетки РАН, ФИЦ ПНЦБИ РАН

Email: safronova@icb.psn.ru
Россия, 142290, Пущино, Московской обл.

Д. А. Серов

Институт биофизики клетки РАН, ФИЦ ПНЦБИ РАН; Институт общей физики им. А.М. Прохорова РАН

Email: safronova@icb.psn.ru
Россия, 142290, Пущино, Московской обл.; 119991, Москва

Е. В. Федорова

Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН

Email: safronova@icb.psn.ru
Россия, 142290, Пущино Московской обл.

В. Г. Сафронова

Институт биофизики клетки РАН, ФИЦ ПНЦБИ РАН

Автор, ответственный за переписку.
Email: safronova@icb.psn.ru
Россия, 142290, Пущино, Московской обл.

Список литературы

  1. Itou T., Collins L.V., Thoren F.B., Dahlgren C., Karlsson A. 2006. Changes in activation states of murine polymorphonuclear leukocytes (PMN) during inflammation: A comparison of bone marrow and peritoneal exudate PMN. Clin. Vaccine Immunol. 13, 575–583. doi: 10.1128/CVI.13.5.575–583.2006
  2. Liew P.X., Kubes P. 2019. The neutrophil’s role during health and disease. Physiol. Rev. 99, 1223–1248. doi: 10.1152/physrev.00012.2018
  3. Rosales C. 2020. Neutrophils at the crossroads of innate and adaptive immunity. J. Leukoc. Biol. 108, 377–396. doi: 10.1002/JLB.4MIR0220–574RR
  4. Nauseef W.M., Borregaard N. 2014. Neutrophils at work. Nat. Immunol. 15, 602–611. doi: 10.1038/ni.2921
  5. Hajishengallis G., Moutsopoulos N.M., Hajishengallis E., Chavakis T. 2016. Immune and regulatory functions of neutrophils in inflammatory bone loss. Semin. Immunol. 28, 146–158. doi: 10.1016/j.smim.2016.02.002
  6. Tan S.-Y., Weninger W. 2017. Neutrophil migration in inflammation: intercellular signal relay and crosstalk. Current Opinion Immunol. 44, 34–42. doi: 10.1016/j.coi.2016.11.002
  7. Richardson I.M., Calo C.J., Hind L.E. 2021. Microphysiological systems for studying cellular crosstalk during the neutrophil response to infection. Front. Immunol. 27, 12:661537. doi: 10.3389/fimmu.2021.661537
  8. Root R.K. 1990. Leukocyte adhesion proteins: Their role in neutrophil function. Trans Am. Clin. Climatol. Assoc. 101, 207–224.
  9. Kolaczkowska E., Kubes P. 2013. Neutrophil recruitment and function in health and inflammation. Nat. Rev. Immunol. 13, 159–175. doi: 10.1038/nri3399
  10. Nourshargh S., Alon R. 2014. Leukocyte migration into inflamed tissues. Immunity. 41, 694–707. doi.org/10.1016/j.immuni.2014.10.008
  11. Filippi M.-D. 2019. Neutrophil transendothelial migration: Updates and new perspectives. Blood. 133, 2149–2158. doi: 10.1182/blood-2018–12–844605
  12. Bouti P., Webbers S.D.S., Fagerholm S.C., Alon R., Moser M., Matlung H.L., Kuijpers T.W. 2021. b2 Integrin signaling cascade in neutrophils: More than a single function. Front. Immunol. 11, 619925. doi: 10.3389/fimmu.2020.619925
  13. Margraf A., Lowell C.A., Zarbock A. 2022. Neutrophils in acute inflammation: Current concepts and translational implications. Blood. 139, 2130–2144. doi: 10.1182/blood.2021012295
  14. Ley K., Laudanna C., Cybulsky M.I., Nourshargh S. 2007. Getting to the site of inflammation: The leukocyte adhesion cascade updated. Nat. Rev. Immunol. 7, 678–689. doi: 10.1038/nri2156
  15. Futosi K., Fodor S., Mócsai A. 2013. Neutrophil cell surface receptors and their intracellular signal transduction pathways. Int. Immunopharmacol. 17, 638–650. doi: 10.1016/j.intimp.2013.06.034
  16. Qiu D., Zhang L., Zhan J., Yang Q., Xiong H., Hu W., Ji Q., Huang J. 2020. Hyperglycemia decreases epithelial cell proliferation and attenuates neutrophil activi-ty by reducing ICAM-1 and LFA-1 expression levels. Front. Genet. 11, 616988. doi: 10.3389/fgene.2020.616988
  17. Conley H.E., Sheats M.K. 2023. Targeting neutrophil β2-integrins: A review of relevant resources, tools, and methods. Biomolecules. 13, 892.
  18. González-Amaro R. 2011. Cell adhesion, inflammation and therapy: Old ideas and a significant step forward. Acta Pharmacol. Sinica. 32, 1431–1432. doi: 10.1038/aps.2011.154
  19. Ren C., Tong Y.L., Li J.C., Lu Z.Q., Yao Y.M. 2017. The protective effect of alpha 7 nicotinic acetylcholine receptor activation on critical illness and its mechanism. Int. J. Biol. Sci. 13, 46–56. doi: 10.7150/ijbs.16404
  20. Belchamber K.B.R., Hughes M.J., Spittle D.A., Walker E.M., Sapey E. 2021. New pharmacological tools to target leukocyte trafficking in lung disease. Front. Immunol. 12, 704173. doi: 10.3389/fimmu.2021.704173
  21. Safronova V.G., Vulfius K.A., Astashev M.E., Tikho-nova I.V., Serov D.A., Jirova E.A., Pershina E.V., Senko D.A., Zhmak M.N., Kasheverov I.E., Tsetlin V.I. 2021. α9α10 nicotinic acetylcholine receptors regulate murine bone marrow granulocyte functions. Immunobiology. 226, 152047. doi: 10.1016/j.imbio.2020.152047
  22. Fujii T., Mashimo M., Moriwaki Y., Misawa H., Ono S., Horiguchi K., Kawashima K. 2017. Expression and function of the cholinergic system in immune cells. Front. Immunol. 8, 1085. doi: 10.3389/fimmu.2017.01085
  23. Herman M., Robert Tarran R. 2020. E-cigarettes, ni-cotine, the lung and the brain: Multi-level cascading pathophysiology. J. Physiol. 598, 5063–5071. doi: 10.1113/JP278388
  24. Shelukhina I., Siniavin A., Kasheverov I., Ojomoko L., Tsetlin V., Utkin Y. 2023. α7- and α9-containing nicotinic acetylcholine receptors in the functioning of immune system and in pain. Int. J. Mol. Sci. 24, 6524. doi: 10.3390/ijms24076524
  25. Slevin M., Iemma R.S., Zeinolabediny Y., Liu D., Ferris G.R., Caprio V., Phillips N., Di Napoli M., Guo B., Zeng X., Al Baradie R., Binsaleh N.K., McDowell G., Fang W.H. 2018. Acetylcholine inhibits monomeric С-reactive protein induced inflammation, endothelial cell adhesion, and platelet aggregation; A potential therapeutic? Front. Immunol. 9, 2124. doi: 10.3389/fimmu.2018.02124
  26. Hamano R., Takahashi H.K., Iwagaki H., Yoshino T., Nishibori M., Tanaka N. 2006. Stimulation of alpha7 nicotinic acetylcholine receptor inhibits CD14 and the toll-like receptor 4 expression in human monocytes. Shock. 26, 358–364. doi: 10.1097/01.shk.0000228168.86845.60
  27. Sato Y., Kosuke Maruyama K., Mikami M., Sato S. 2023. Effects of nicotine and lipopolysaccharide stimulation on adhesion molecules in human gingival endothelial cells. Odontology. 111, 428–438. doi: 10.1007/s10266–022–00753–1
  28. Scott D.A., Palmer R.M. 2002. The influence of tobacco smoking on adhesion molecule profiles. Tob. Induc. Dis. 1, 7–25. doi: 10.1186/1617–9625–1–1–7
  29. Li Z.-Z., Guo Z.-Z., Zhang Z., Cao Q.-A., Zhu Y.-J., Yao H.-L., Wu L.-L., Dai Q.-Y. 2015. Nicotine-induced upregulation of VCAM-1, MMP-2, and MMP-9 through the α7-nAChR-JNK pathway in RAW264.7 and MOVAS cells. Mol. Cell. Biochem. 399, 49–58. doi: 10.1007/s11010–014–2231-z
  30. Yong T., Zheng M.Q., Linthicum D.S. 1997. Nicotine induces leukocyte rolling and adhesion in the cerebral microcirculation of the mouse. J. Neuroimmunol. 80, 158–164. doi: 10.1016/s0165–5728(97)00151–3
  31. Grando S.A. 2006. Cholinergic control of epidermal cohesion. Exp. Dermatol. 15, 265–282. doi: 10.1111/j.0906–6705.2006.00410.x
  32. Chernyavsky A.I., Arredondo J., Vetter D.E., Grando S.A. 2007. Central role of alpha9 acetylcholine receptor in coordinating keratinocyte adhesion and motility at the initiation of epithelialization. Exp. Cell. Res. 313, 3542–3555. doi: 10.1016/j.yexcr.2007.07.011
  33. Chernyavsky A.I., Galitovskiy V., Grando S.A. 2015. Molecular mechanisms of synergy of corneal muscarinic and nicotinic acetylcholine receptors in upregulation of E-cadherin expression. Int. Immunopharmacol. 29, 15–20. doi: 10.1016/j.intimp.2015.04.036
  34. Mashimo M., Moriwaki Y., Misawa H., Kawashima K., Fujii T. 2021. Regulation of Immune functions by non-neuronal acetylcholine (ACh) via muscarinic and nicotinic ACh receptors. Int. J. Mol. Sci. 22, 6818. doi: 10.3390/ijms22136818
  35. Safronova V.G., Vulfius C.A., Shelukhina I.V, Mal’tseva V.N., Berezhnov A.V, Fedotova E.I., Miftahova R.G., Kryukova E.V., Grinevich A.A., Tsetlin V.I. 2016. Nicotinic receptor involvement in regulation of functions of mouse neutrophils from inflammatory site. Immunobiology. 221, 761–772. doi: 10.1016/j.imbio.2016.01.016
  36. Boxio R., Bossenmeyer-Pourie C., Steinckwich N., Dournon C., Nusse O. 2004. Mouse bone marrow contains large numbers of functionally competent neutrophils. J. Leukoc. Biol. 75, 604–611. doi: 10.1189/jlb.0703340
  37. Filina J.V., Gabdoulkhakova A.G., Safronova V.G. 2014. RhoA/ROCK downregulates FPR2-mediated NADPH oxidase activation in mouse bone marrow granulocytes. Cell. Signal. 26, 2138–2146. doi: 10.1016/j.cellsig.2014.05.017
  38. Shelukhina I.V., Kryukova E.V., Lips K.S., Tsetlin V.I., Kummer W. 2009. Presence of alpha7 nicotinic acetylcholine receptors on dorsal root ganglion neurons proved using knockout mice and selective alpha-neurotoxins in histochemistry. J. Neurochem. 109, 1087–1095. doi: 10.1111/j.1471–4159.2009.06033.x
  39. Lykhmus O., Voytenko L.P., Lips K.S., Bergen I., Krasteva-Christ G., Vetter D.E., Kummer W., Skok M. 2017. Nicotinic acetylcholine receptor α9 and α10 subunits are expressed in the brain of mice. Front. Cell. Neurosci. 11, 282. doi: 10.3389/fncel.2017.00282
  40. Russell M.A., Jarvis M., Iyer R., Feyerabend C. 1980. Relation of nicotine yield of cigarettes to blood nicotine concentrations in smokers. Br. Med. J. 280, 972–976. doi: 10.1136/bmj.280.6219.972
  41. Benowitz N.L., Hukkanen J., Jacob P. 3rd. 2009. Nicotine chemistry, metabolism, kinetics and biomarkers. Handb. Exp. Pharmacol. 192, 29–60. doi: 10.1007/978–3–540–69248–5_2
  42. Alama A., Bruzzo C., Cavalieri Z., Forlani A., Utkin Y., Casciano I., Romani M. 2011. Inhibition of the nicotinic acetylcholine receptors by cobra venom α-neurotoxins: Is there a perspective in lung cancer treatment? PLoS One. 6, e20695. doi: 10.1371/journal.pone.0020695
  43. McIntosh J.M., Dowell C., Watkins M., Garrett J.E., Yoshikami D., Olivera B.M. 2002. Alpha-conotoxin GIC from Conus geographus, a novel peptide antagonist of nicotinic acetylcholine receptors. J. Biol. Chem. 277, 33610–33615. doi: 10.1074/jbc.M205102200
  44. Chi S.W., Kim D.H., Olivera B.M., McIntosh J.M., Han K.H. 2004. Solution conformation of alpha-conotoxin GIC, a novel potent antagonist of alpha3beta2 nicotinic acetylcholine receptors. Biochem. J. 1, 347–352. doi: 10.1042/BJ20031792
  45. Sambasivarao S.V., Roberts J., Bharadwaj V.S., Slingsby J.G., Rohleder C., Mallory C., Groome J.R., McDougal O.M., Maupin M.C. 2014. Acetylcholine promotes binding of α-conotoxin MII for α3β2 nicotinic acetylcholine. Chembiochem. 15, 413–424. doi: 10.1002/cbic.201300577
  46. Kasheverov I., Kudryavtsev D., Shelukhina I., Nikolaev G., Utkin Y., Tsetlin V. 2022. Marine origin ligands of nicotinic receptors: Low molecular compounds, peptides and proteins for fundamental research and practical applications. Biomolecules. 12, 189. doi: 10.3390/biom12020189
  47. Bouzat C., Sine S.M. 2018. Nicotinic acetylcholine receptors at the single-channel level. Br. J. Pharmacol. 175, 1789–1804. doi: 10.1111/bph.13770
  48. Corringer P.J., Poitevin F., Prevost M.S., Sauguet L., Delarue M., Changeux J.P. 2012. Structure and pharmacology of pentameric receptor channels: From bacteria to brain. Structure. 20, 941–956. doi: 10.1016/j.str.2012.05.003
  49. Papke R.L., Lindstrom J.M. 2020. Nicotinic acetylcholine receptors: Conventional and unconventional ligands and signaling. Neuropharmacology. 168, 108021. doi: 10.1016/j.neuropharm.2020.108021
  50. Stokes C., Treinin M., Papke R.L. 2015. Looking below the surface of nicotinic acetylcholine receptors. Trends Pharmacol. Sci. 36, 514–523. doi: 10.1016/j.tips.2015.05.002
  51. King J.R., Kabbani N. 2016. Alpha 7 nicotinic receptor coupling to heterotrimeric G proteins modulates RhoA activation, cytoskeletal motility, and structural growth. J. Neurochem. 138, 532–545. doi: 10.1111/jnc.13660
  52. Oz M., King J.R., Yang K.-H.S., Khushaish S., Tchugunova Y., Khajah M.A., Luqmani Y.A., Kabbani N. 2023. α7 nicotinic acetylcholine receptor interaction with G proteins in breast cancer cell proliferation, motility, and calcium signaling. PLoS One. 18, e0289098. doi: 10.1371/journal.pone.0289098
  53. Brown E.J., Frazier W.A. 2001. Integrin-associated protein (CD47) and its ligands. Trends Cell. Biol. 11, 130–135. doi: 10.1016/s0962–8924(00)01906–1
  54. Locht C., Antoine R. 2021. The history of pertussis toxin. Toxins (Basel). 13, 623. doi: 10.3390/toxins13090623
  55. St-Pierre S., Jiang W., Roy P., Champigny C., Le-Blanc E., Morley B.J., Hao J., Simard A.R. 2016. Nicotinic acetylcholine receptors modulate bone marrow-derived pro-inflammatory monocyte production and survival. PLoS One. 11, e0150230. doi: 10.1371/journal.pone.0150230
  56. Tracey K.J. 2002. The inflammatory reflex. Nature. 420, 853–859. doi: 10.1038/nature01321
  57. Pavlov V.A., Chavan S.S., Tracey K.J. 2018.Molecular and functional neuroscience in immunity. Ann. Rev. Immunol. 36, 783–812. doi: 10.1146/annurev-immunol-042617–053158
  58. Caravaca A.S., Gallina A.L., Tarnawski L., Shavva V.S., Colas R.A., Dalli J., Malin S.G., Hult H., Arnardottir H., Olofsson P.S. 2022. Vagus nerve stimulation promotes resolution of inflammation by a mechanism that involves Alox15 and requires the α7nAChR subunit. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 119, e2023285119. doi: 10.1073/pnas.2023285119
  59. Grassi L., Pourfarzad F., Ullrich S., Merkel A., Were F., Carrillo-de-Santa-Pau E., Yi G., Hiemstra I.H., Tool A.T.J., Mul E., Perner J., Janssen-Megens E., Berentsen K., Kerstens H., Habibi E., Gut M., Yaspo M.L., Linser M., Lowy E., Datta A., Clarke L., Flicek P., Vingron M., Roos D., van den Berg T.K., Heath S., Rico D., Frontini M., Kostadima M., Gut I., Valencia A., Ouwehand W.H., Stunnenberg H.G., Martens J.H.A., Kuijpers T.W. 2018. Dynamics of transcription regulation in human bone marrow myeloid differentiation to mature blood neutrophils. Cell Reports. 24, 2784–2794. doi: 10.1016/j.celrep.2018.08.018
  60. Khoyratty T.E., Ai Z., Ballesteros I., Eames H.L., Mathie S., Martín-Salamanca S., Wang L., Hemmings A., Willemsen N., von Werz V., Zehrer A., Walzog B., van Grinsven E., Hidalgo A., Udalova I.A. 2021. Distinct transcription factor networks control neutrophil-driven inflammation. Nat. Immunol. 22, 1093–1106. doi: 10.1038/s41590–021–00968–4
  61. Evrard M., Kwok I.W.H., Chong S.Z., Teng K.W.W., Becht E., Chen J., Sieow J.L., Penny H.L., Ching G.C., Devi S., Adrover J.M., Li J.L.Y., Liong K.H., Tan L., Poon Z., Foo S., Chua J.W., Su I.-H., Balabanian K., Bachelerie F., Biswas S.K., Larbi A., Hwang W.Y.K., Madan V., Koeffler H.P., Wong S.C., Newell E.W., Hidalgo A., Ginhoux F., Ng L.G. 2019. Developmental analysis of bone marrow neutrophils reveals populations specialized in expansion, trafficking, and effector functions. Blood. 133, 2149–2158. doi: 10.1182/blood-2018–12–844605
  62. Serov D.A., Tikhonova I.V., Safronova V.G., Astashev M.E. 2021. Calcium activity in response to nAChR ligands in murine bone marrow granulocytes with different Gr-1 expression. Cell Biol. International. 45, 1533–1545. doi: 10.1002/cbin.11593
  63. Yvan-Charvet L., Ng L.G. 2019. Granulopoiesis and neutrophil homeostasis: A metabolic, daily balancing act. Trends Immunol. 40, 598–612. doi: 10.1016/j.it.2019.05.004
  64. Cormier A., Paas Y., Zini R., Tillement J.-P., Lagrue G., Changeux J.-P., Grailhe R. 2004. Long-term exposure to nicotine modulates the level and activity of acetylcholine receptors in white blood cells of smokers and model mice. Mol. Pharmacol. 66, 1712–1718. doi: 10.1124/mol.104.000463
  65. Cesaro L., Pinna L.A., Salvi M. 2015. A comparative analysis and review of lysyl residues affected by posttranslational modifications. Curr. Genomics. 16, 128–138. doi: 10.2174/1389202916666150216221038
  66. Buccitelli C., Selbach M. 2020. mRNAs, proteins and the emerging principles of gene expression control. Nat. Rev. Genet. 21, 630–644. doi: 10.1038/s41576–020–0258–4

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать
2. Рис. 1. Влияние лигандов нАХР на адгезию КМ-гранулоцитов контрольных животных и животных с воспалением. Показано действие 100 мкМ никотина (а) или одного из антагонистов и антагониста совместно с никотином на адгезию интактных клеток: 10 нМ α-CTX (б), 10 нМ GIC (в), 5 нМ MII (г), 200 нМ MII (д), 10 нМ RgIA (е) или 50 нМ Vc1.1 (ж). Одиночное действие токсинов на адгезию КМ-гранулоцитов контрольных мышей и животных с воспалением представлено двумя столбцами слева соответственно, действие никотина (100 мкМ) в присутствии одного из антагонистов – двумя столбцами справа в каждой группе диаграмм (б–ж); для сравнения показано действие никотина на интактные клетки (а). Присутствие или отсутствие вещества обозначены “+” или “–“ соответственно. * – Значимое отличие от параметра, принятого за 100%; # – отличие эффекта агента в контрольной и “воспалительной” группах; & – различие между действием антагониста и совместно антагонист + никотин на интактные клетки, p < 0.05.

Скачать (311KB)
Метаданные
3. Рис. 2. Визуализация субъединицы α7 нАХР на КМ-гранулоцитах. Микрофотографии гранулоцитов костного мозга мыши: а, б – флуоресцентные сигналы NucRed и AF488-α-CTX соответственно; в – изображение в видимом свете; г – наложение изображений. Примеры гранулоцитов показаны стрелками. Масштабная линейка: 10 мкм.

Скачать (530KB)
Метаданные
4. Рис. 3. Визуализация субъединицы α10 нАХР на КМ-гранулоцитах. Микрофотографии клеток после обработки первичным анти-α10 нАХР и вторичным AF488-анти-IgG антителами: а, б – флуоресцентные сигналы NucRed и AF488-α-CTX соответственно; в – изображение в видимом свете; г – наложение изображений. Примеры гранулоцитов показаны стрелками. Масштабная линейка: 10 мкм.

Скачать (800KB)
Метаданные
5. Рис. 4. Влияние никотина и коклюшного токсина (PTX) на адгезию КМ-гранулоцитов. Клетки инкубировали с никотином, PTX или с обоими веществами в течение 2 ч. Показано действие: 10 и 100 мкМ никотина (а); 300 нг/мл PTX (б); совместно 10 мкМ никотина и PTX (в). Обозначения: “+” и “– ” – присутствие или отсутствие вещества соответственно; * – отличие от параметра интактных клеток; # – различие между параметром клеток контрольных животных и животных с воспалением; n = 4, p < 0.05.

Скачать (143KB)
Метаданные
6. Рис. 5. Действие никотина на адгезию в присутствии ингибиторов компонентов внутриклеточной сигнализации. а – Сравнение действия ингибиторов на адгезию КМ-гранулоцитов мышей контрольной группы (черные столбцы) и мышей с воспалением (серые столбцы). Эффект каждого из ингибиторов в группах рассчитан по отношению величины ΔOD от клеток, обработанных одним из ингибиторов, к величине ΔOD от интактных клеток, принятой за 100%. б – Показаны эффекты: 100 мкМ никотина на интактные клетки (1) и 100 мкМ никотина совместно с 10 нМ стауроспорином (2); 50 нМ тирфостином 51 (3), 10 нМ вортманнином (4) или 140 нМ Y27632 (5). Эффект никотина в каждой группе рассчитан: а – как отношение величины ΔOD от клеток, обработанных никотином, к величине ΔOD от интактных клеток, принятой за 100%; б – как отношение величины ΔOD от клеток, обработанных никотином + один из ингибиторов, к величине ΔOD от клеток, обработанных тем же ингибитором, принятой за 100%. Проведено 5–16 независимых измерений. * – Значимое отличие от параметра, принятого за 100%; # – различие между параметром клеток контрольных животных и животных с воспалением; & – отличие от эффекта никотина на интактные клетки, p < 0.05.

Скачать (266KB)
Метаданные
7. Рис. 6. Пример результата электрофореза продуктов ПЦР в агарозном геле. Показаны синтезированные ампликоны субъединиц нАХР α3 (Chrna3), α7 (Chrna7), α9 (Chrna9), α10 (Chrn10), β2 (Chrnb2) и β-актина (Actb) в пробах гранулоцитов костного мозга мыши BALB/c (Gr), в образце из головного мозга мыши (Br) и образце из тимуса мыши (Th). Тимус и головной мозг мыши взяты в качестве положительного контроля. M – маркер длин ДНК (п. о.).

Скачать (506KB)
Метаданные

© Российская академия наук, 2024