Terapevticheskii arkhivTerapevticheskii arkhivТерапевтический архив0040-36602309-5342LLC Obyedinennaya Redaktsiya3360610.26442/00403660.2019.07.000330Editorial articleПередовая статьяResearch ArticleMolecular diagnosis angioimmunoblastic T-cell lymphomaМолекулярная диагностика ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфомыChernovaN GЧерноваНаталья Геннадьевна

к.м.н., врач-гематолог отд-ния интенсивной высокодозной химиотерапии лимфом с круглосуточным и дневным стационаром ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, тел.: 8(495)612-48-10, 8(916)660-27-63; e-mail: ngchernova@mail.ru; ORCID: 0000-0002-0827-4052

ngchernova@mail.ruSidorovaY VСидороваЮлия Владимировна

к.м.н., с.н.с. лаб. молекулярной гематологии ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; ORCID: 0000-0003-1936-0084

SmirnovaS YСмирноваСветлана Юрьевна

н.с. лаб. молекулярной гематологии ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; ORCID: 0000-0001-6220-8868

RyzhikovaN VРыжиковаНаталья Валерьевна

н.с. лаб. молекулярной гематологии ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; ORCID: 0000-0003-2424-9524

NikulinaE EНикулинаЕлена Евгеньевна

н.с. лаб. молекулярной гематологии ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; ORCID: 0000-0003-3914-8611

KovriginaA MКовригинаАлла Михайловна

д.б.н., проф., зав. патологоанатомическим отд-нием ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; ORCID: 0000-0002-1082-8659

SinitsynaM NСиницынаМарина Николаевна

н.с. патологоанатомического отд-ния ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; ORCID: 0000-0002-0750-8005

SudarikovA BСудариковАндрей Борисович

д.б.н., зав. лаб. молекулярной гематологии ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России; ORCID: 0000-0001-9463-9187

National Research Center for HematologyФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» Минздрава России15072019917VOL 91, NO7 (2019)ТОМ 91, №7 (2019)636916042020Copyright ©; 2019, Consilium MedicumCopyright ©; 2019, ООО "Консилиум Медикум"2019Consilium MedicumООО "Консилиум Медикум"https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0https://ter-arkhiv.ru/0040-3660/article/view/33606

Aim: to determine molecular diagnostics routine for different tissue samples in angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Materials and methods. Molecular studies were performed for 84 primary AITL patients. The median age was 61 year (29-81); the male to female ratio was 48/36. T-cell and B-cell clonality was assessed by GeneScan analysis of rearranged T-cell receptor (TCRG, TCRB) and immunoglobulin heavy chain genes. For the quantitative determination of cells with RHOA G17V mutation real - time polymerase chain reaction (PCR) with allele - specific LNA modified primers was used. Results. In lymph nodes rearrangements of T-cell receptor genes were determined in 76 (90.5%) of 84 patients and were absent in 8 (9.5%) cases. Identification of the same clonal products of the TCRG and TCRB genes in the lymph node and in peripheral blood and/or bone marrow indicated the prevalence of the tumor process and was observed in 64.7% of patients. Clonal products in peripheral blood and/or bone marrow different from those in the lymph node indicated reactive cytotoxic lymphocyte population and were noted in 58.8% of AITL cases. Simultaneous detection of T- and B-cell clonality in the lymph node was observed in 20 (24.7%) of 81 patients. Cells with RHOA G17V mutation were detected in lymph node in 45 (54.9%) of 82 patients. The use of allele - specific PCR with LNA modified primers revealed presence of the tumor cells in peripheral blood in 100% and in bone marrow in 93.9% of patients with G17V RHOA mutation in the lymph nodes. Conclusion. The validity of different molecular assays performed on certain tissue samples for the diagnosis of angioimmunoblastic T-cell lymphoma has been evaluated. Quantitative allele - specific PCR assay for RHOA G17V mutation based on LNA modified primers possesses sufficient sensitivity for tumor process prevalence evaluation and minimal residual disease monitoring.

Цель: определить показания и последовательность проведения молекулярных исследований при ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфоме (АИТЛ) в различном биологическом материале. Материалы и методы. Молекулярные исследования проведены у 84 первичных больных АИТЛ. Медиана возраста составила 61 (29-81) год, соотношение мужчины/женщины - 48/36. Оценку T-клеточной и В-клеточной клональности проводили по реаранжировкам генов цепей T-клеточного рецептора и тяжелых цепей иммуноглобулинов. Для количественного определения клеток с мутацией G17V гена RHOA применяли полимеразную цепную реакцию (ПЦР) в реальном времени с аллель - специфичными LNA модифицированными праймерами. Результаты. В биоптатах лимфатических узлов реаранжировки генов цепей Т-клеточных рецепторов определены у 76 (90,5%) из 84 больных и отсутствовали в 8 (9,5%) случаях. Выявление одинаковых клональных продуктов амплификации генов TCRG и TCRB в биоптате лимфатического узла и в образцах периферической крови и/или костного мозга свидетельствовало о лейкемизации опухолевого процесса и наблюдалось у 64,7% больных. Определение в образцах периферической крови и/или костного мозга клональных продуктов, отсутствующих в лимфатическом узле, обусловлено реактивной цитотоксической популяцией лимфоцитов и наблюдалось в 58,8% случаев АИТЛ. Одновременное выявление Т- и В-клеточной клональности в биоптате лимфатического узла отмечалось у 20 (24,7%) из 81 больного. Клетки с мутацией G17V гена RHOA выявлены в биоптатах лимфоузлов у 45 (54,9%) из 82 пациентов. Применение метода аллель - специфичной ПЦР с LNA модифицированными праймерами позволило выявить лейкемизацию опухолевого процесса у 100% и поражение костного мозга - у 93,9% пациентов с выявленной мутацией в лимфоузлах. Заключение. В результате выполненной работы определены показания и последовательность проведения молекулярных исследований при АИТЛ в различном биологическом материале. Количественная аллель - специфичная ПЦР с LNA модифицированными праймерами для определения мутации G17V гена RHOA обладает высокой чувствительностью, позволяет верифицировать лейкемизацию опухолевого процесса и проводить мониторинг минимальной резидуальной болезни во время терапии.

T-cell receptor and immunoglobulin heavy chains genes rearrangementsRHOA G17V mutationangioimmunoblastic T-cell lymphomaреаранжировка генов T-клеточного рецептора и тяжелых цепей иммуноглобулиновмутация G17V гена RHOAангиоиммунобластная Т-клеточная лимфомаSwerdlow S.H, Campo E, Harris N.L, Jaffe E.S, Pileri S.A, Stein H, Thiele J, Arber D.A, Hasserjian R.P, Le Beau M.M, Orazi A, Siebert R. WHO classification of tumors of haematopoietic and lymphoid tissues. Lyon: IARC, 2017:407-10.Frizzera G, Moran E.M, Rappaport H. Angioimmunoblastic lymphadenopathy with dysproteinaemia. Lancet. 1974;1:1070-3.Lukes R.J, Tindle B.H. Immunoblastic lymphadenopathy. A hyperimmune entity resembling Hodgkin's disease. N Engl J Med. 1975;292(1):1-8.Frizzera G, Moran E.M, Rappaport H. Angio - immunoblastic lymphadenopathy: diagnosis and clinical course. Am J Med.1975;59:803-18.Willenbrock K, Renné C, Gaulard P, Hansmann M.L. In angioimmunoblastic T-cell lymphoma, neoplastic T cells may be a minor cell population. A molecular single - cell and immunohistochemical study. Virchows Arch. 2005;446(1):15-20. doi: 10.1007/s00428-004-1114-1de Leval L, Gisselbrecht C, Gaulard P. Advances in the understanding and management of angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Br J Haematol. 2010;148(5):673-89. doi: 10.1111/j.1365-2141.2009.08003.xWeiss L.M, Jaffe E.S, Liu X.F, Chen Y.Y, Shibata D, Medeiros L.J. Detection and localization of Epstein-Barr viral genomes in angioimmunoblastic lymphadenopathy and angioimmunoblastic lymphadenopathy - like lymphoma. Blood. 1992;79:1789-95.Dogan A, Attygalle A.D, Kyriakou C. Angioimunoblastic T-cell lymphoma. Br J Haematol. 2003;121:681-91.Стефанов Д.Н., Ковригина А.М., Поддубная И.В. Новая концепция происхождения ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфомы: от молекулярной биологии к терапии. Бюллетень СО РАМН. 2011;31(2):14-9.Dupuis J, Boye K, Martin N, Copie-Bergman C, Plonquet A, Fabiani B, Baglin A.C, Haioun C, Delfau-Larue M.H, Gaulard P. Expression of CXCL13 by neoplastic cells in angioimmunoblastic T-cell lymphoma (AITL). A new diagnostic marker providing evidence that AITL derives from follicular helper T-cells. Am J Surg Pathol. 2006;30:490-4.Lachenal F, Berger F, Ghesquières H, Biron P, Hot A, Callet-Bauchu E, Chassagne C, Coiffier B, Durieu I, Rousset H, Salles G. Angioimmunoblastic T-cell lymphoma: clinical and laboratory features at diagnosis in 77 patients. Medicine (Baltimore). 2007;86(5):282-92. doi: 10.1097/MD.0b013e3181573059Чернова Н.Г., Виноградова Ю.Е., Сидорова Ю.В., Капланская И.Б., Гилязитдинова Е.А., Горенкова Л.Г., Марьин Д.С., Кременецкая А.М., Воробьев А.И., Кравченко С.К. Длительные режимы цитостатической терапии ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфомы. Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2014;7(1):57-62.Tan B.T, Warnke R.A, Arber D.A. The frequency of B- and T-cell gene rearrangements and Epstein-Barr virus in T-cell lymphomas: a comparison between angioimmunoblastic T-cell lymphoma and peripheral T-cell lymphoma, unspecified with and without associated B-cell proliferations. J Mol Diagn. 2006;8(4):466-75. doi: 10.2353/jmoldx.2006.060016Сидорова Ю.В., Никулина Е.Е., Чернова Н.Г., Горенкова Л.Г., Гилязитдинова Е.А., Кравченко С.К., Ковригина А.М., Судариков А.Б. Определение клональности методом ПЦР при ангиоиммунобластной Т-клеточной лимфоме. Клиническая онкогематология. Фундаментальные исследования и клиническая практика. 2014;7(2):192-6.Чернова Н.Г., Сидорова Ю.В., Захарько Е.И., Наумова Е.В., Рыжикова Н.В., Гальцева И.В., Двирнык В.Н., Смирнова С.Ю., Судариков А.Б., Кохно А.В., Моисеева Т.Н., Луговская С.А., Звонков Е.Е., Савченко В.Г. Проточная цитометрия и ПЦР-исследование Т-клеточной клональности в разграничении опухолевой и реактивной пролиферации больших гранулярных лимфоцитов. Гематология и трансфузиология. 2018;2:124-33. doi: 10.25837/HAT.2018.48.2.003Сидорова Ю.В., Никитин Е.А., Меликян А.Л., Пивник А.В., Судариков А.Б. Определение T-клеточной клональности при инфекционном мононуклеозе методом ПЦР-SSCP-TCRγ. Гематология и трансфузиология. 2004;49(6):1-7.Smirnova S.J, Sidorova J.V, Tsvetaeva N.V, Nikulina O.F, Biderman B.V, Nikulina E.E, Kulikov S.M, Sudarikov A.B. Expansion of CD8+ cells in autoimmune hemolytic anemia. Autoimmunity. 2016;49(3):147-54. doi: 10.3109/08916934.2016.1138219Sakata-Yanagimoto M, Enami T, Yoshida K, Shiraishi Y, Ishii R, Miyake Y, Muto H, Tsuyama N, Sato-Otsubo A, Okuno Y, Sakata S, Kamada Y, Nakamoto-Matsubara R, Tran N.B, Izutsu K, Sato Y, Ohta Y, Furuta J, Shimizu S, Komeno T, Sato Y, Ito T, Noguchi M, Noguchi E, Sanada M, Chiba K, Tanaka H, Suzukawa K, Nanmoku T, Hasegawa Y, Nureki O, Miyano S, Nakamura N, Takeuchi K, Ogawa S, Chiba S. Somatic RHOA mutation in angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Nat Genet. 2014;46(2):171-5. doi: 10.1038/ng.2872Nakamoto-Matsubara R, Sakata-Yanagimoto M, Enami T, Yoshida K, Yanagimoto S, Shiozawa Y, Nanmoku T, Satomi K, Muto H, Obara N, Kato T, Kurita N, Yokoyama Y, Izutsu K, Ota Y, Sanada M, Shimizu S, Komeno T, Sato Y, Ito T, Kitabayashi I, Takeuchi K, Nakamura N, Ogawa S, Chiba S. Detection of the G17V RHOA mutation in angioimmunoblastic T-cell lymphoma and related lymphomas using quantitative allele - specific PCR. PLoS One. 2014;9(10):e109714. doi: 10.1371/journal.pone.010 9714Kataoka K, Ogawa S. Variegated RHOA mutations in human cancers. Exp Hematol. 2016;44(12):1123-9. doi: 10.1016/j.exphem.2016.09.002Manso R, González-Rincón J, Rodríguez-Justo M, Roncador G, Gоmez S, Sánchez-Beato M, Piris M.A, Rodriguez-Pinilla S.M. Overlap at the molecular and immunohistochemical levels between angioimmunoblastic T-cell lymphoma and a subgroup of peripheral T-cell lymphomas without specific morphological features. Oncotarget. 2018;9(22):16124-33. doi: 10.18632/oncotarget.24592Dongen J.J, Langerak A.W, Bruggemann M, Evans P.A, Hummel M, Lavender F.L, Delabesse E, Davi F, Schuuring E, Garcia-Sanz R, Krieken J.H, Droese J, Gonzalez D, Bastard C, White H.E, Spaargaren M, Gonzalez M, Parreira A, Smith J.L, Morgan G.J, Kneba M, Macintyre E.A. Design and standardization of PCR primers and protocols for detection of clonal immunoglobulin and T-cell receptor gene recombinations in suspect lymphoproliferations: report of the BIOMED-2 Concerted Action BMH4-CT98-3936. Leukemia. 2003;17(12):2257-317. doi: 10.1038/sj.leu.2403202Sidorova Yu.V, Chernova N.G, Sinitsyna M.N, Aleksenko M.Y, Glinshchikova O.A, Smirnova S.Yu, Ryzhikova N.V, Nikulina E.E, Zakharko E.I, Rybkina E.B, Dvirnyk V.N, Kovrigina A.M, Zvonkov E.E, Sudarikov A.B. Monitoring of RHOA G17V mutation during the course of therapy in patients with angioimmunoblastic T-cell lymphoma by quantitative allele - specific PCR with LNA-modified primers. Hemasphere. Abstract book. 23rd Congress of the European Hematology Association. 2018;2(S):89-90.Smirnova S, Sidorova Y, Chernova N, Zvonkov E, Sinitsyna M, Sychevskaya K, Glinshchikova O, Ryzhikova N, Kovrigina A, Sudarikov A. CD8+ T-cell clones persistent in bone marrow and peripheral blood during course of CD4+ angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Haematologica. 2017;102(suppl 1):578, E1403.Zaki M.A, Wada N, Kohara M, Ikeda J, Hori Y, Fujita S, Ogawa H, Sugiyama H, Hino M, Kanakura Y, Morii E, Aozasa K. Presence of B-cell clones in T-cell lymphoma. Eur J Haematol. 2011;86(5):412-9. doi: 10.1111/j.1600-0609.2011.01597.xHiggins J.P, van de Rijn M, Jones C.D, Zehnder J.L, Warnke R.A. Peripheral T-cell lymphoma complicated by a proliferation of large B-cells. Am J Clin Pathol. 2000;114:236-47.Lome-Maldonado C, Canioni D, Hermine O, Delabesse E, Damotte D, Raffoux E, Gaulard P, Macintyre E, Brousse N. Angioimmunoblastic T-cell lymphoma (AILD-TL) rich in large B-cells and associated with Epstein-Barr virus infection. A different subtype of AILD-TL? Leukemia. 2002;16:2134-41. doi: 10.1038/sj.leu.2402642Xu Y, Mc Kenna R.W, Hoang M.P, Collins R.H, Kroft S.H. Composite angioimmunoblastic T-cell lymphoma and diffuse large B-cell lymphoma: a case report and review of the literature. Am J Clin Pathol. 2002;118:848-54. doi: 10.1309/VD2D-98ME-MB3F-WH34Huang J, Zhang P.H, Gao Y.H, Qiu L.G. Sequential development of diffuse large B-cell lymphoma in a patient with angioimmunoblastic T-cell lymphoma. Diagn Cytopathol. 2012;40:346-51. doi: 10.1002/dc.21641Chernova N.G, Sidorova J.V, Margolin O.V, Maryin D.S, Al-Radi L.S, Moiseeva T.N, Kovrigina A.M, Kremenetskaya A.M, Vorobiev A.I, Kravchenko S.K. Hodgkin lymphoma in patient with angioimmunoblastic T-cell lymphoma. J Haematologica. 2013;98(suppl 2):27, P081.Latorra D, Campbell K, Wolter A, Hurley J.M. Enhanced allele - specific PCR discrimination in SNP genotyping using 3' locked nucleic acid (LNA) primers. Hum Mutat. 2003;22(1):79-85. doi: 10.1002/humu.10228