Terapevticheskii arkhivTerapevticheskii arkhivТерапевтический архив0040-36602309-5342LLC Obyedinennaya Redaktsiya33363Editorial articleПередовая статьяExperience in theuse of polymerase chain reaction for determining T-cellclonalityОПЫТ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯТ-КЛЕТОЧНОЙ КЛОНАЛЬНОСТИSidorovaYu VСидороваЮ В

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

NikitinE AНикитинЕ А

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

PekloMПеклоМ

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

VlasikT NВласикТ Н

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

SamoilovaR SСамойловаР С

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

KravchenkoS KКравченкоС К

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

MelikyanA LМеликянА Л

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

VinogradovaYu EВиноградоваЮ Е

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

PivnikA VПивникА В

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

SudarikovA BСудариковА Б

ГНЦ РАМН; Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва

ГНЦ РАМНРоссийский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, МоскваГНЦ РАМНРоссийский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ, Москва15072003787NO7 (2003)ТОМ 78, №7 (2003)485213042020Copyright ©; 2003, Consilium MedicumCopyright ©; 2003, ООО "Консилиум Медикум"2003Consilium MedicumООО "Консилиум Медикум"https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0https://ter-arkhiv.ru/0040-3660/article/view/33363

Aim. To distinguish T-cell lymphomas and reactive T-cell proliferation it is important to confirm the ability of T-cells to be cloned. Conventional histological and immunophenotypic methods fail to determine the ability of T-cells to be cloned. An experience in the use of detection of T-cell receptor gene gamma-chain (TCRy) rearrangement for determining T-cellular clonality is described. Material and methods. Polymerase chain reaction (PCR) and single strand conformational polymorphism (SSCP) were used to determine T-cell clonality. Twenty healthy donors, 28 patients with T-lymphomas, and 26patients with various non-T-cell lymphoproliferative disorders or reactive processes were studied. Results. T-cell monoclonality was detected in 23/28 (82%) T-cell lymphoma cases, whereas in all the samples from normal subjects a polyclonal pattern of rearrangements TCRy was found. The sensitivity of the method was estimated as 2,5%, 7%, and 10% was demonstrated for bone marrow, spleen, and peripheral blood, respectively. Conclusion. PCR-SSCP for TCRy was found to be a useful supplement to routine histological and immunophenotypic methods in the diagnosis of T-cell lymphomas.

Цель исследования. При дифференциальной диагностике реактивной Т-клеточной пролиферации и опухолевой важно подтвердить клональность Т-клеток. Классические методы гистологии и иммунофенотипирования не позволяют оценить Т-клеточную клональность. Мы приводим наш опыт определения Т-клеточной клональности по реаранжировкам у-цепи Т-клеточного рецептора (TCRy). Материалы и методы. Определение Т-клеточной клональности по реаранжировкам у-цепи Т-клеточного рецептора проводилось при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим анализом конформационного полиморфизма одноцепочечных продуктов (SSCP). Обследовали 20 здоровых (доноров), 28 больных с Т-клеточными опухолями и 26 с различными не Т-клеточными опухолями и реактивными процессами. Результаты. Выявляемость Т-клеточной клональности у больных с доказанными Т-клеточными лимфомами составила 82% (23/28), при этом у всех здоровых (доноров) продемонстрирован поликлональный характер реаранжировок TCRy. Чувствительность метода составила 2,5, 7 и 10% для костного мозга, селезенки и периферической крови соответственно. Заключение. Метод ПЦР-SSCP для TCRy является хорошим дополнением к классическим цитологическим, гистологическим и иммунофенотипическим методам в диагностике Т-клеточных лимфатических опухолей.

T-cell clonalityrearrangement of T-cell receptor genesmolecular diagnosislymphomasТ-клеточная клональностьперестройки генов Т-клеточных рецепторовмолекулярная диагностикалимфомыВоробьев А. И., Кременецкая А. М., Харазшивили Д. Опухоли лимфатической системы. Гематол. и трансфузиол 2000; 3: 1-14.WHO. Classification of neoplasms of the hematopoietic amlymphoid tissues / Harris N. L., Jaffe E. S., Diebold J. et al Airlie House, Virginia 1997.Никитин E. А., Левина E. А., Судариков А. Б. Роль молекулярных методов в диагностике и мониторинге лимфопролиферативных заболеваний. Гематол. и трансфузиол 2001; 3: 19-26.Signoretti S., Murphy M., Cangi M. G. et al. Detection of clonal T-cell receptor у gene rearrangements in paraffm-embeddectissue by polymerase chain reaction and nonradioactive singlestrand conformational polymorphism analysis. Am. J. Pathol 1999; 154 (1): 67-75.Rezuke W. N., Abernathy E. C., Tsongalis G. J. Molecular diagnosis of B- and T-cell lymphomas: fundamental principles and clinical applications. Clin. Chem. 1997; 43 (10): 1814- 1823.Arber D. A. Molecular diagnostic approach to non-Hodgkin'slymphoma. J. Mol. Diagn. 2000; 2 (4): 178-190.Arber D. A., Braziel R. M., Bagg A., Bijwaard К. Е. Evaluation of T cell receptor testing in limphoid neoplasms. Results of a Multicenter study of 29 extracted DNA and paraffin-embedded samples. Ibid. 2001; 3 (4): 133-140.Cabras A. D., Kremer M., Schulz S. et al. Quality assessment in diagnostic molecular pathology: experience from a German- Austrian-Swiss multicenter trial. Virchows Arch. 2000; 437 (1): 46-51.Greiner Т. С. Advances in molecular hematopathology: T-cell receptor у and bcl-2 genes. Am. J. Pathol. 1999; 154 (1): 7- 10.Mainl M. K., Casorati G., Dellabona P. et al. T-cell clonality in immune responses. Immunol. Today 1999; 20 (6): 262-266.Callan M. F., Steven N., Krausa P. et al. Large clonal expansions of CD8+ T cells in acute infectious mononucleosis. Nat. Med. 1996; 2 (8): 906-911.Southern E. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis. J. Mol. Biol. 1975; 98: 503-517.Langerok A. W., Wolvers-Tettero I. L. M., van Dongen J. J. M. Detection of T cell receptor beta (TCRB) gene rearrangement pattern in T-cell malignancies by Southern blot analysis. Leukemia 1999; 13: 965-974.Moreau E. J., Langerak A. W., van Gastel-Mol E. J. et al. Easy detection of all TCRG gene rearrangements by Southern blotanalysis: recommendations for optimal results. Ibid. 1620- 1626.Greiner T. C., Raffeld M., Lutz С. et al. Analysis of T-cell receptor-gamma gene rearrangements by denaturing gradient gelelectrophoresis of GC-clamped polymerase chain reaction products', correlation with tumor-specific sequences. Am. J. Pathol. 1995; 146: 46-55.Orita M., Iwahana H., Kanazawa H. et al. Detection of polymorphism by human DNA by gel electrophoresis as singlestrand conformation polymorphism. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989; 86 (8): 209-214.Lynas C., Howe D. Simple, reliable detection of T cell clones by PCR-L1S-SSCP analysis of TCRy rearrangement. Mol. Cell. Probes 1998; 12: 41-48.Lefranc M.-P., Lefranc G. The T cell receptor facts book. London: Academic Press; 2001.Breit T. M., Wolvers-Tettero L. M., Hahlen K. et. al. Extensive junctional diversity of gamma delta T-cell receptors expressed by T-cell acute lymphoblastic leukemias: implications for the detection of minimal residual disease. Leukemia 1992; 6 (2): 169-170.Kneba M., Bolz I., Linke B. et al. Characterization of clonespecific rearrangement T-cell receptor gamma-chain genes in lymphomas and leukemias by the polymerase chain reaction and DNA sequencing. Blood 1994; 84 (2): 574-581.Theodorou I., Delfau Larue M. H., Bigorgne C. et al. Cutaneous T-cell infiltrates: analysis of T-cell receptor gamma gene rearrangement by polymerase chain reaction and denaturing gradient gel electrophoresis. Blood 1995; 86: 305-310.Dippel E., Assaf C., Hummel M. et al. Clonal T-cell receptor gamma-chain gene rearrangement by PCR-based GeneScan analysis in advanced cutaneous T-cell lymphoma: a critical evaluation. J. Pathol. 1999; 188: 146.Klemke С. D., Dippel E., Dembinski A. et al. Clonal T cell receptor gamma-chain gene rearrangement by PCR-based GeneScan analysis in the skin and blood of patients with parapsoriasis and early-stage mycosis fungoides. Ibid. 2002; 197 (3): 348-354.Theriault C., Galoin S., Valmary S. et al. PCR analysis of immunoglobulin Heavy chain (IgH) and TcR-gamma chain generearrangements in the diagnosis of lymphoproliferative disorders: Results of study of 525 cases. Mod. Pathol. 2000; 13 (12): 1269-1279.Miwa H., Nosaka Т., Kita K. et al. Immunogenotypes of lymphoid malignancies; the rearrangement of T cell receptor beta chain gene can occur before the gamma chain gene rearrangement. Jpn J. Cancer Res. 1988; 79 (4):484-490.Asou N., Matsuoka M., Hattori T. et al. T cell gamma gene rearrangements in hematologic neoplasms. Blood 1987; 69 (3): 968-970.Szczepanski Т., Langerak A. W., Wolvers-Tetero I. L. M. et al. Immunoglobulin and T cell receptor gene rearrangement pattern in acute lymphoblastic leukemia are less mature in adults than in children: implications for selection of PCR targets for detection of minimal residual disease. Leukemia 1998; 12: 1081-1088.Fodinger M., Winkler K., Mannhalter C., Chott A. Combined polymerase chain reaction approach for clonality detection in lymphoid neoplasms. Diagn. Mol. Pathol. 1999; 8 (2): 80-91.Wickham C. L., Lynas C., Ellard S. Detection of clonal T cell populations by high resolution PCR using fluorescently labelled nucleotides, evaluation using conventional LIS-SSCP. J. Clin. Mol. Pathol. 2000; 53: 150-154.Dippel E., Klemke D., Hummel M. et al. T-cell clonality of undetermined significance. Blood 2001; 98 (1): 247-248.Posnett D. N., Sinha R., Kabak S., Russo С. Clonal populations of T cells in normal elderly humans: the T cell equivalent to benign monoclonal gammapathy". J. Exp. Med. 1994; 179 (2): 609-618.