д.м.н., проф. каф. патологической физиологии, доц. каф. пропедевтики внутренних болезней и гастроэнтерологии, н.с. лаб. функциональных методов исследования в гастроэнтерологии
академик РАН, д.м.н., проф., зав. каф. пропедевтики внутренних болезней и гастроэнтерологии
ст. лаборант каф. патологической физиологии
к.м.н., ассист. каф. пропедевтики внутренних болезней и гастроэнтерологии; н.с. лаб. функциональных методов исследования в гастроэнтерологии
аспирант каф. пропедевтики внутренних болезней и гастроэнтерологии
д.м.н., проф., зав. каф. патологической физиологии
Aim. A generalized analysis of changes in functional activity of macrophages on the basis of phagocytic activity, cytokine profile, changes in the level of expression of surface markers characteristic of pro - or anti-inflammatory phenotype of the cells when exposed to reluctate. Materials and methods. Developed in vitro model of co-peritoneal macrophages of mice With57/BL6 (n=65) and reluctate patients with gastroesophageal reflux disease (GERD; n=65) having different pH values (three group comparison). Took into account the standard criteria phagocytic ability (absorption Staphylococcus aureus 9198, light microscopy), secretory activity (cytokine profile Th1/Th2, flow cytometry) and receptor characterization of macrophages (expression of CD25/80/163/206, flow cytometry). Results. The phagocytic activity of macrophages, calculated on the basis of the average number of bacteria ingested by one phagocyte, is not associated with the pH value of the added reluctate. It is established that the alkalinisation of reluctate leads to significant alteration in the expression of CD receptors - decrease M1 and increase M2. The index of total production of Th1/Тһ2 in groups progressively decreased with increasing pH of reluctate and amounted to 3.6 units in the group pH from 4.6 to 6.6; 2.8 units group a pH of 6.7-7.2 and 1.6 units in the group pH of 7.3 to 8.1, due to increased production of Th2 cytokines at offset reluctate pH to slightly alkaline side. The data obtained indicate the increase of expression and secretion of anti-inflammatory markers at an alkaline pH shift of reluctate. Analysis of the studied characteristics of the activity profile of macrophages in the proposed in vitro model justifies the need for considering the peculiarities of the functional activity of macrophages under the influence of reluctate different nature. The special importance of studying the cytokine profile and characteristics of the functional activity of macrophages in patients with GERD, given the nature of reluctate.
Цель исследования. Обобщенный анализ изменений функциональной активности макрофагов на основании данных о фагоцитарной активности, цитокиновом профиле, изменении уровня экспрессии поверхностных маркеров, характерных для про - или антивоспалительного фенотипа клеток при воздействии рефлюктатов различного типа. Материалы и методы. Разработана in vitro модель кокультивирования перитонеальных макрофагов мышей С57/BL6 (n=65) и рефлюктатов пациентов с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью (ГЭРБ; n=65), имеющих различные значения рН (три группы сравнения). Учитывались стандартные критерии - фагоцитарная способность (поглощение Staphylococcus aureus 9198, световая микроскопия), секреторная активность (цитокиновый профиль Th1/Th2, проточная цитометрия) и рецепторная характеристика макрофагов (экспрессия CD25/80/163/206, проточная цитометрия). Результаты. Показатели фагоцитарной активности макрофагов, вычисленные на основании среднего количества бактерий, поглощенных одним фагоцитом, не ассоциированы с величиной рН добавляемого рефлюктата. Установлено, что защелачивание рефлюктата ведет к значимому изменению экспрессии CD-рецепторов - снижению М1 и увеличению М2. Индекс суммарной продукции Th1/Тh2 в группах прогрессивно снижался с увеличением рН рефлюктата и составил 3,6 единицы в группе рН 4,6-6,6; 2,8 единицы в группе рН 6,7-7,2 и 1,6 единицы в группе рН 7,3-8,1, что обусловлено увеличением продукции Th2-цитокинов при смещении рН рефлюктата в слабощелочную сторону. Полученные данные указывают на увеличение экспрессии и секреции антивоспалительных маркеров при щелочном сдвиге рН рефлюктата. Анализ изучаемых характеристик профиля активности макрофагов в предлагаемой in vitro модели обосновывает необходимость учета особенностей функциональной активности макрофагов при воздействии на них рефлюктатов различного характера. Показана особая значимость изучения цитокинового профиля и особенностей функциональной активности макрофагов у больных ГЭРБ с учетом характера рефлюктата.