Terapevticheskii arkhivTerapevticheskii arkhivТерапевтический архив0040-36602309-5342LLC Obyedinennaya Redaktsiya30202Editorial articleПередовая статьяResearch ArticlePcr definition of b-cell clonality: which electrophoretic method is betterОпределение В-клеточной клональности методом пцр: какой электрофоретический метод лучше?SidorovaIu VСидороваЮ ВNikitinE AНикитинЕ АRyzhikovaN VРыжиковаН ВSudarikovA BСудариковА БГУ Гематологический научный центр РАМН, Москва15072008807VOL 80, NO7 ()ТОМ 80, №7 (2008)434709042020Copyright ©; 2008, Consilium MedicumCopyright ©; 2008, ООО "Консилиум Медикум"2008Consilium MedicumООО "Консилиум Медикум"https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/4.0https://ter-arkhiv.ru/0040-3660/article/view/30202

Aim. To compare diagnostic efficacy of B-cell clonality determination in application of different electrophoretic methods. Material and methods. B-cell clonality was determined with different techniques in 89 patients having B-cell lymphoma (n = 48), B-cell lymphoma in remission (n = 11), reactive processes (n = 24), lymphogranulomatosis and T-cell lymphoma (n = 6). Healthy donors served control. Clonality was defined by rearrangements of Ig heavy chain genes with usage of primers to FR2 region of Ig gene. Electrophoretic methods were the following: agarose electrophoresis and SSCP. Results. Clonality was detected in the presence of more than 5.9% clonal cells from total count of mononuclear cells or more than 20% of clonal cells from total number of B-lymphocytes in the sample. We achieved detectability of B-clonality in B-cell tumors 87.5% (42 of 48 cases). False negative tests were also investigated with kits of primers to FR1 and FR3 regions, but clonality was not determined. Among reactive processes, non-B-cell tumors and healthy donors clonality was found in 1 of 41 cases. This patient had acute respiratory viral infection. Agarose electrophoresis and SSCP test results coincided. Conlusion. Determination of B-cell clonality with agarose electrophoresis proved to be a simple, reliable, cost-effective and reproducible method of differential diagnosis of tumor and reactive lymphoproliferation. This method is not suitable for verification of tumor remission or assessment of minimal residual disease because of its low sensitivity.

Цель исследования. Сравнить диагностическую эффективность определения В-клеточной клональности при использовании разных электрофоретических методов. Материалы и методы. Исследован материал 89 пациентов (48 - с В-клеточными лимфомами, 11 - с В-клеточными лимфомами в ремиссии, 24 - с реактивными процессами, 6 - с лимфогранулематозом и Т-клеточными лимфомами) и 10 здоровых доноров. Клональностъ определяли по реаранжировкам генов тяжелой цепи иммуноглобулина (Ig). Использовали оригинальный набор праймеров к FR2 области гена иммуноглобулина. В качестве электрофоретических методов использовали агарозный электрофорез и метод SSCP (анализ конформационного полиморфизма одноцепочечных фрагментов ДНК в полиакриламидном геле). Результаты. Клональность выявляется при наличии более 5,9% клональных клеток от общего количества мононуклеаров или более 20% клональных клеток от общего количества В-лимфоцитов в образце. В нашей работе выявляемость В-клональности при В-клеточных опухолях составила 87,5% (42 из 48 случаев). Ложноотрицательные пробы были дополнительно исследованы при помощи наборов праймеров к FR1- и FR3-областям, однако клональность не была выявлена. Среди реактивных процессов, не B-клеточных опухолей и здоровых доноров клональность была выявлена в 1 случае из 41, у пациента с острой респираторной вирусной инфекцией. Результаты агарозного электрофореза и SSCP-анализа полностью совпали. Заключение. Определение B-клеточной клональности с помощью агарозного электрофореза показало себя как простой, надежный, недорогой и воспроизводимый метод дифференциальной диагностики опухолевой и реактивной лимфопролиферации. Данный метод не подходит для подтверждения ремиссии опухоли или оценки минимальной остаточной болезни в связи с его низкой чувствительностью.

B-cell clonalityrearrangements of heavy chain genes of immunoglobulinsmolecular diagnosislymphomклональность В-клеточнаяперестройки генов тяжелых цепей иммуноглобулиновмолекулярная диагностикалимфомНикитин Е. А., Ленива Е. А., Судариков А. Б. Роль молекулярных методов в диагностике и мониторинге лимфопролиферативных заболеваний. Гемагол. и трансфузиол. 2001; 3: 19-26.Bahloul М., Asnafi V., Macintyre Е. Clinical impact of molecular diagnostics in low-grade lymphoma. Best Pract. J. Res. Clin. Haematol. 2005; 18 (1): 97-111.Harris N. L., Jaffe E. S., Diebold J. et al. WHO classification of neoplasms of the hematopoietic and lymphoid tissues. Hematol. J. 2000; 1 (1): 53-66.Rezuke W. N., Abernathy E. G., Tsongalis G. J. Molecular diagnosis of B- and T-cell lymphomas: fundamental principles and clinical applications. Clin. Chem. 1997; 43 (10): 1814-1823.Arber D. A. Molecular diagnostic approach to non-Hodgkin's lymphoma. J. Mol. Diagn. 2000; 2 (4): 178-190.Sioutos N., Bagg A., Michaud G. Y. et al. Polymerase chain reaction versus Southern blot hybridization: detection of immunoglobulin heavy-chain gene rearrangements. Diagn. Mol. Pathol. 1995; 4: 8-13.Van Dongen J. J. M., Wolvers-Tettero I. L. M. Analysis of immunoglobulin and T cell receptor genes. Part II: possibilities and limitations in the diagnosis and management of lympho-proliferative diseases and related disorders. Clin. Chim. Acta 1991; 198: 93-174.Theriault C., Galoin S., Valmary S. et al. PCR analysis of immunoglobulin heavy chain (IgH) and TcR-gamma chain gene rearrangements in the diagnosis of lymphoproliferative disorders: Results of a study of 525 cases. Mod Pathol 2000; 13 (12): 1269-1279.Diss Т. C., Liu H. X., Du M. Q., Isaacson P. O. Improvements to В cell clonality analysis using PCR amplification of immunoglobulin light chain genes. Mol. Pathol. 2002; 55 (2): 98-101.Amara K., Trimeche M., Ziadi S. et al. PCR-based clonality analysis of B-cell lymphomas in paraffin-embedded tissues: diagnostic value of immunoglobulin kappa and lambda light chain gene rearrangement investigation. Pathol. Res. Pract. 2006; 202 (6): 425-431.Bagg A., Braziel R. M., Arber D. A. et al. Immunoglobulin heavy chain gene analysis in lymphomas: a multi-center study demonstrating the heterogeneity of performance of polymerase chain reaction assays. J. Mol. Diagn. 2002; 4 (2): 81-89.Никитин E. А., Сидорова Ю. В., Рыжикова H. В. и др. Определение Т-клеточной клональности по гамма-цепи Т-клеточного рецептора: окончательные данные. Тер. арх. 2006; 78 (7): 52-57.Сидорова Ю. В., Никитин Е. А., Пекло М. М. и др. Опыт использования ПЦР для определения Т-клеточной клональности. Тер. арх. 2003; 7: 48-52.Lefranc М. P., Lefranc G. The Т cell receptor facts book. London: Academic Press; 2001.Orita M., Iwahana H., Kanazawa H. et al. Detection of polymorphism by human DNA by gel electrophoresis as single-strand conformation polymorphism. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989; 86 (8): 2766-2770.Lynas C., Howe D. Simple, reliable detection of T cell clones by PCR-LIS-SSCP analysis of TCRg rearrangement. Mol. Cell. Probes 1998; 12: 41-48.Derksen P. W., Langerak A. W., Kerkhof E. et al. Comparison of different polymerase chain reaction-based approaches for clonality assessment of immunoglobulin heavy-chain gene rearrangements in B-cell neoplasia. Mod. Pathol. 1999; 12 (8): 794-805.Hoeve M. A., Krol A. D., Philippo K. et al. Limitations of clonality, analysis of В cell proliferations using CDR3 polymerase chain reaction. Mol. Pathol. 2000; 53 (4): 194-200.Wu X., Feng J., Komori A. et ai. Immunoglobulin somatic hypermutation: double-strand DNA breaks, AID and error-prone DNA repair. J. Clin. Immunol. 2003; 23 (4): 235-246.Wu X., Kaartinen M. The somatic hypermutation activity of a follicular lymphoma links to large insertions and deletions of immunoglobulin genes. Scand. J. Immunol. 1995; 42 (1): 52-59.