Определение В-клеточной клональности методом пцр: какой электрофоретический метод лучше?


Цитировать

Полный текст

Аннотация

Цель исследования. Сравнить диагностическую эффективность определения В-клеточной клональности при использовании разных электрофоретических методов. Материалы и методы. Исследован материал 89 пациентов (48 - с В-клеточными лимфомами, 11 - с В-клеточными лимфомами в ремиссии, 24 - с реактивными процессами, 6 - с лимфогранулематозом и Т-клеточными лимфомами) и 10 здоровых доноров. Клональностъ определяли по реаранжировкам генов тяжелой цепи иммуноглобулина (Ig). Использовали оригинальный набор праймеров к FR2 области гена иммуноглобулина. В качестве электрофоретических методов использовали агарозный электрофорез и метод SSCP (анализ конформационного полиморфизма одноцепочечных фрагментов ДНК в полиакриламидном геле). Результаты. Клональность выявляется при наличии более 5,9% клональных клеток от общего количества мононуклеаров или более 20% клональных клеток от общего количества В-лимфоцитов в образце. В нашей работе выявляемость В-клональности при В-клеточных опухолях составила 87,5% (42 из 48 случаев). Ложноотрицательные пробы были дополнительно исследованы при помощи наборов праймеров к FR1- и FR3-областям, однако клональность не была выявлена. Среди реактивных процессов, не B-клеточных опухолей и здоровых доноров клональность была выявлена в 1 случае из 41, у пациента с острой респираторной вирусной инфекцией. Результаты агарозного электрофореза и SSCP-анализа полностью совпали. Заключение. Определение B-клеточной клональности с помощью агарозного электрофореза показало себя как простой, надежный, недорогой и воспроизводимый метод дифференциальной диагностики опухолевой и реактивной лимфопролиферации. Данный метод не подходит для подтверждения ремиссии опухоли или оценки минимальной остаточной болезни в связи с его низкой чувствительностью.

Полный текст

Определение В-клеточной клональности методом пцр: какой электрофоретический метод лучше?. - Цель исследования. Сравнить диагностическую эффективность определения В-клеточной клональности при использовании разных электрофоретических методов. Материалы и методы. Исследован материал 89 пациентов (48 - с В-клеточными лимфомами, 11 - с В-клеточными лимфомами в ремиссии, 24 - с реактивными процессами, 6 - с лимфогранулематозом и Т-клеточными лимфомами) и 10 здоровых доноров. Клональностъ определяли по реаранжировкам генов тяжелой цепи иммуноглобулина (Ig). Использовали оригинальный набор праймеров к FR2 области гена иммуноглобулина. В качестве электрофоретических методов использовали агарозный электрофорез и метод SSCP (анализ конформационного полиморфизма одноцепочечных фрагментов ДНК в полиакриламидном геле). Результаты. Клональность выявляется при наличии более 5,9% клональных клеток от общего количества мононуклеаров или более 20% клональных клеток от общего количества В-лимфоцитов в образце. В нашей работе выявляемость В-клональности при В-клеточных опухолях составила 87,5% (42 из 48 случаев). Ложноотрицательные пробы были дополнительно исследованы при помощи наборов праймеров к FR1- и FR3-областям, однако клональность не была выявлена. Среди реактивных процессов, не B-клеточных опухолей и здоровых доноров клональность была выявлена в 1 случае из 41, у пациента с острой респираторной вирусной инфекцией. Результаты агарозного электрофореза и SSCP-анализа полностью совпали. Заключение. Определение B-клеточной клональности с помощью агарозного электрофореза показало себя как простой, надежный, недорогой и воспроизводимый метод дифференциальной диагностики опухолевой и реактивной лимфопролиферации. Данный метод не подходит для подтверждения ремиссии опухоли или оценки минимальной остаточной болезни в связи с его низкой чувствительностью.
×

Об авторах

Ю В Сидорова

ГУ Гематологический научный центр РАМН, Москва

Е А Никитин

ГУ Гематологический научный центр РАМН, Москва

Н В Рыжикова

ГУ Гематологический научный центр РАМН, Москва

А Б Судариков

ГУ Гематологический научный центр РАМН, Москва

Список литературы

  1. Никитин Е. А., Ленива Е. А., Судариков А. Б. Роль молекулярных методов в диагностике и мониторинге лимфопролиферативных заболеваний. Гемагол. и трансфузиол. 2001; 3: 19-26.
  2. Bahloul М., Asnafi V., Macintyre Е. Clinical impact of molecular diagnostics in low-grade lymphoma. Best Pract. J. Res. Clin. Haematol. 2005; 18 (1): 97-111.
  3. Harris N. L., Jaffe E. S., Diebold J. et al. WHO classification of neoplasms of the hematopoietic and lymphoid tissues. Hematol. J. 2000; 1 (1): 53-66.
  4. Rezuke W. N., Abernathy E. G., Tsongalis G. J. Molecular diagnosis of B- and T-cell lymphomas: fundamental principles and clinical applications. Clin. Chem. 1997; 43 (10): 1814-1823.
  5. Arber D. A. Molecular diagnostic approach to non-Hodgkin's lymphoma. J. Mol. Diagn. 2000; 2 (4): 178-190.
  6. Sioutos N., Bagg A., Michaud G. Y. et al. Polymerase chain reaction versus Southern blot hybridization: detection of immunoglobulin heavy-chain gene rearrangements. Diagn. Mol. Pathol. 1995; 4: 8-13.
  7. Van Dongen J. J. M., Wolvers-Tettero I. L. M. Analysis of immunoglobulin and T cell receptor genes. Part II: possibilities and limitations in the diagnosis and management of lympho-proliferative diseases and related disorders. Clin. Chim. Acta 1991; 198: 93-174.
  8. Theriault C., Galoin S., Valmary S. et al. PCR analysis of immunoglobulin heavy chain (IgH) and TcR-gamma chain gene rearrangements in the diagnosis of lymphoproliferative disorders: Results of a study of 525 cases. Mod Pathol 2000; 13 (12): 1269-1279.
  9. Diss Т. C., Liu H. X., Du M. Q., Isaacson P. O. Improvements to В cell clonality analysis using PCR amplification of immunoglobulin light chain genes. Mol. Pathol. 2002; 55 (2): 98-101.
  10. Amara K., Trimeche M., Ziadi S. et al. PCR-based clonality analysis of B-cell lymphomas in paraffin-embedded tissues: diagnostic value of immunoglobulin kappa and lambda light chain gene rearrangement investigation. Pathol. Res. Pract. 2006; 202 (6): 425-431.
  11. Bagg A., Braziel R. M., Arber D. A. et al. Immunoglobulin heavy chain gene analysis in lymphomas: a multi-center study demonstrating the heterogeneity of performance of polymerase chain reaction assays. J. Mol. Diagn. 2002; 4 (2): 81-89.
  12. Никитин E. А., Сидорова Ю. В., Рыжикова H. В. и др. Определение Т-клеточной клональности по гамма-цепи Т-клеточного рецептора: окончательные данные. Тер. арх. 2006; 78 (7): 52-57.
  13. Сидорова Ю. В., Никитин Е. А., Пекло М. М. и др. Опыт использования ПЦР для определения Т-клеточной клональности. Тер. арх. 2003; 7: 48-52.
  14. Lefranc М. P., Lefranc G. The Т cell receptor facts book. London: Academic Press; 2001.
  15. Orita M., Iwahana H., Kanazawa H. et al. Detection of polymorphism by human DNA by gel electrophoresis as single-strand conformation polymorphism. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989; 86 (8): 2766-2770.
  16. Lynas C., Howe D. Simple, reliable detection of T cell clones by PCR-LIS-SSCP analysis of TCRg rearrangement. Mol. Cell. Probes 1998; 12: 41-48.
  17. Derksen P. W., Langerak A. W., Kerkhof E. et al. Comparison of different polymerase chain reaction-based approaches for clonality assessment of immunoglobulin heavy-chain gene rearrangements in B-cell neoplasia. Mod. Pathol. 1999; 12 (8): 794-805.
  18. Hoeve M. A., Krol A. D., Philippo K. et al. Limitations of clonality, analysis of В cell proliferations using CDR3 polymerase chain reaction. Mol. Pathol. 2000; 53 (4): 194-200.
  19. Wu X., Feng J., Komori A. et ai. Immunoglobulin somatic hypermutation: double-strand DNA breaks, AID and error-prone DNA repair. J. Clin. Immunol. 2003; 23 (4): 235-246.
  20. Wu X., Kaartinen M. The somatic hypermutation activity of a follicular lymphoma links to large insertions and deletions of immunoglobulin genes. Scand. J. Immunol. 1995; 42 (1): 52-59.

Дополнительные файлы

Доп. файлы
Действие
1. JATS XML
Скачать

© ООО "Консилиум Медикум", 2008

Creative Commons License
Эта статья доступна по лицензии Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.
 

Адрес издателя

  • 127055, г. Москва, Алабяна ул., 13, корп.1

Адрес редакции

  • 127055, г. Москва, Алабяна ул., 13, корп.1

По вопросам публикаций

  • +7 (926) 905-41-26
  • editor@ter-arkhiv.ru

По вопросам рекламы

  • +7 (495) 098-03-59

 

  


Данный сайт использует cookie-файлы

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.

О куки-файлах